NUSAP1在膀胱癌中的表达及其对膀胱癌增殖和侵袭转移的影响

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目的探讨NUSAP1在膀胱癌当中的表达情况及其对膀胱癌增殖和侵袭转移的影响方法采用GSE3167芯片、RT-PCR、免疫组化和Western blotting检测膀胱癌中NUSAP1的mRNA及蛋白表达水平,采用PrognoScan在线数据库进行生存分析。为便于分析NUSAP1对膀胱癌细胞功能的影响,采用小分子干扰RNA(NC,siNUSAP1)和过表达质粒(NC,NUSAP1)分别转染5637和T24细胞株。采用CCK-8和EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,CCK-8检测药物敏感性的改变,划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭转移能力的变化,Western blotting检测EMT及TGF-β信号通路相关蛋白的表达水平。结果通过对GSE3167芯片、RT-PCR、免疫组化和Western blotting进行分析,显示NUSAP1在膀胱癌组织和膀胱癌细胞株中高表达。PrognoScan生存分析结果显示NUSAP1表达高的患者预后较差。CCK-8和EdU结果提示,在敲低NUSAP1的5637细胞株当中,与其NC组相比较,siNUSAP1组的增殖能力明显降低;在T24细胞中,过表达NUSAP1后,NUSAP1组的增殖能力相对于NC组明显增强。同时,通过流式细胞术分析观察到,5637细胞株的siNUSAP1组相对于NC组出现G2/M期阻滞及凋亡增加,而在过表达NUSAP1的T24细胞中则可见凋亡相对NC组减少。此外,通过CCK-8观察到,与5637的NC组相比较,5637的siNUSAP1组对吉西他滨(gemcitabine,GEM)的药物敏感性明显增加;而在过表达NUSAP1的T24细胞中,与NC组相比较,NUSAP1组对GEM的药物敏感性则相对下降。通过Transwell实验和细胞划痕实验,观察到在5637的siNUSAP1组中,细胞的侵袭迁移能力明显降低,而在T24细胞中过表达NUSAP1后则观察到了相反的现象。Western blotting结果表明敲低NUSAP1可逆转5637细胞的上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),而在T24当中过表达NUSAP1,则会增强其EMT。进一步通过生物信息学研究发现,膀胱癌当中的NUSAP1与TGF-β受体复合物及Smad2/3密切相关,且与TGF-β受体1(Transforming growth factoβreceptor 1,TGFBR1)呈正相关。Western blotting结果表明,敲低5637中的NUSAP1后,TGFBR1、p-Smad2/3及vimentin蛋白表达量明显降低,E-cadherin蛋白表达明显增高;而在T24中过表达NUSAP1后则观察到了相反的结果。结论本研究结果表明,NUSAP1在膀胱癌中表现出促癌基因的作用,并可通过TGF-β信号通路促进膀胱癌的侵袭转移。
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