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研究表明,雌激素参与缺血性脑卒中的神经保护作用。雌激素主要与雌激素受体结合,通过基因组模式或非基因组模式发挥生物学效应。新近发现的ER-a36是ER-a一个亚型,它广泛表达在乳腺、卵巢、肝、骨等细胞和组织中,并可介导膜起始的雌激素信号通路。本室前期研究发现,ER-a36也广泛表达在脑内多个区域,但作用尚不明确。本实验利用RNA干扰技术建立的ER-a36基因敲低细胞系,通过免疫细胞化学、免疫细胞荧光、MTT、Hoechst染色、荧光素酶分析、Western blot等方法,探讨了ER-α36在PC12细胞血清营养剥夺耐受性中的作用,为临床预防和治疗缺血性脑卒中提供实验依据。结果：1.原代培养不同时间的皮层和海马神经元中均有ER-α36表达,且主要分布在胞浆和胞膜上,并与Caveolin-1共定位。原代培养的皮层神经元和海马神经元纯度较高,NSE免疫阳性率均达到97%。2.PC12细胞对血清营养剥夺的耐受具有明显的时间和血清浓度依赖性。细胞在含2.5%血清的无酚红培养基中生长速度减慢,其存活率与正常培养PC12细胞相比显著降低,以此可建立血清营养剥夺细胞模型；此外,细胞在血清剥夺(0.5%血清)2h时,不会发生凋亡。3.敲低ER-a36,降低了细胞对低浓度E2的敏感性,增强了细胞血清营养剥夺的耐受性。其中,pM和nM级别的E2对PC12细胞促增殖作用减弱；PC12细胞血清营养剥夺4h开始凋亡,敲低ER-a36后细胞血清营养剥夺8h开始凋亡。4. ER-a36介导E2激活的MAPK信号通路影响PC12细胞的营养剥夺(低血清)耐受性。在PC12细胞中转染ER-a36表达质粒后再分别用不同浓度E2处理,与未用E2处理组相比,低浓度E2增强荧光素酶活性,10pM最为显著。ER-α36参与血清营养剥夺的细胞增殖和存活通路,并介导E2激活的MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路的交叉对话,同时介导低浓度E2激活的MAPK信号通路。结论：敲低ER-a36降低PC12细胞对低浓度E2的敏感性、增强细胞血清营养剥夺的耐受性；ER-a36参与E2激活的增殖信号通路影响PC12细胞血清营养剥夺(低血清)耐受性。