柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)是近百年来柑橘产业所面临的最为严重的病害之一,世界各国尚未找到切实可行的防治该病害的有效方法。我国的黄龙病是由亚洲种病原菌(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas)引起。CLas在病树体内分布不均匀,并且在不同柑橘品种间以及品种的不同生长期之间均存在浓度差异。本实验比较了OMEGA试剂盒法、BIOPURE试剂盒(磁珠法)法、非试剂盒的Genesee column法这三种方法提取的DNA质量,确定了DNA的提取方法。在此基础上用Real-time实时荧光定量PCR对CLas在染病砂糖橘、红心蜜柚、沙田柚以及W-默科特带果枝条上的时空分布规律进行系统分析,主要研究结果如下:1、比较了上述三种方法提取的柑橘果皮和叶中脉组织DNA的质量,证实OMEGA试剂盒法为实验室检测黄龙病时的最优DNA提取方法。2、不同品种柑橘枝条的各部位检测出CLas的概率不同:染病沙田柚枝条、红心蜜柚枝条的各部位总检出率均为100%。W-默科特砂糖橘染病枝条各部位总检出率分别为96.2%和96.4%。在所有品种的染病枝条的中,橘络的CLas检出率均为100%。3、在柑橘成熟季节,同一枝条上不同组织中的病原菌数量存在显著差异:果实中的病菌浓度显著高于叶片处。砂糖橘和W-默科特的枝条中的黄龙病菌浓度在均橘络处呈最大值;而CLas在沙田柚和红心蜜柚枝条上均在果轴处为最大值。4、CLas浓度在不同季节或不同柑橘生长期的枝条上呈动态变化。总体上随着果实成熟度的递增,病原菌逐渐在果实处(特别是橘络和果轴)富集,而叶片上的CLas浓度呈下降趋势。5、不同品种和不同时期的染病植株在症状表现上存在差异:染病砂糖橘、沙田柚、红心蜜柚的叶片症状比W-默科特明显;染病砂糖橘在果实成熟期症状最为明显。砂糖橘的红鼻子果、红心蜜柚、沙田柚的不对称畸形果可以作为田间快速诊断的依据。由于黄龙病病菌尚未能进行人工培养,该病害的防控和病原致病机理的研究进展缓慢。因此,本研究确定了一种较好的病菌DNA获得方法,对黄龙病菌在带果柑橘枝条上的时空分布规律进行系统分析,为病菌分离培养找到合适材料提供思路;也为黄龙病的早期检测、诊断提供信息,进而指导病害防控。