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目的:研究不同剂量的丹芍颗粒含药血清对脂多糖(LPS)诱导的系膜细胞增殖后NF-κB p65、IκB、MMP-2等因子的调控作用,探讨不同剂量丹芍颗粒治疗过敏性紫癜性肾炎的机制。 方法:体外培养:LPS诱导大鼠系膜细胞(HBEH)增殖,采用不同剂量丹芍颗粒含药血清进行干预,24小时后收集细胞,western blotting法测定NF-κB p65、IκB、MMP-2等因子的蛋白表达情况;PCR法测定NF-κB p65mRNA的表达情况;各组细胞经免疫荧光细胞化学染色法处理后,其MMP-2蛋白表达情况通过激光共聚焦显微镜观察。 结果:1.Western blotting法显示:LPS诱导HBEH细胞增殖后,NF-κB p65蛋白表达升高(P<0.05);与LPS组相比较,各含药血清组NF-κB p65蛋白表达量下降(P<0.05)。由此可知,含药血清组能降低LPS诱导的HBEH细胞增殖后NF-κB p65蛋白的表达。2.Western blotting法显示:LPS诱导HBEH细胞增殖后,IκB蛋白表达下降(P<0.05);与LPS组相比较,各含药血清组IκB蛋白表达量上升(P<0.05)。由此可知,含药血清组能增高LPS诱导的HBEH细胞增殖后IκB蛋白的表达。3.Western blotting法显示:LPS诱导HBEH细胞增殖后,MMP-2蛋白表达升高(P<0.05);与LPS组相比较,低剂量含药血清组MMP-2蛋白表达量下降(P<0.05)。由此可知,低剂量含药血清组能降低LPS诱导的HBEH细胞增殖后MMP-2蛋白的表达。4.PCR法显示:LPS诱导HBEH细胞增殖后,NF-κB p65mRNA表达升高(P<0.05);与LPS组相比较,各含药血清组NF-κB p65mRNA表达量下降(P<0.05)。由此可知,含药血清组能降低LPS诱导的HBEH细胞增殖后NF-κB p65mRNA的表达。5.免疫荧光法显示:正常组核内几乎不见荧光表达,提示正常组HBEH细胞核内几乎没有MMP-2蛋白表达;LPS组细胞核内荧光强度高,提示LPS诱导后引起HBEH细胞增殖,进而引起细胞核内MMP-2蛋白表达增高;各含药血清组HBEH细胞核内荧光强度低于LPS组,提示含药血清对LPS诱导后增殖的HBEH细胞核内MMP-2蛋白的表达有下调作用(P<0.05)。 结论:丹芍颗粒含药血清能调节大鼠系膜细胞对NF-κB、IκB以及MMP-2的分泌,这可能是丹芍颗粒治疗过敏性紫癜性肾炎的机制。