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前言关节软骨由于其缺乏自身血液循环系统,仅靠关节滑液提供大部分营养,因此一旦损伤则很难修复。在目前软骨组织工程研究中,自体软骨细胞作为种子细胞面临的难题是:体外培养的软骨细胞生长缓慢,极易发生去分化,以致难以获得满足组织工程软骨构建所需的数量足够且保持其正常表型的软骨种子细胞。因此如何在使用合适浓度的生长因子等细胞因子的联合刺激下,通过适当延长软骨细胞的体外传代次数,有利于获得既有足够数量并保持良好表型的软骨细胞,以使自体软骨细胞作为软骨组织工程种子细胞成为目前研究的热点。骨形态发生蛋白-14(Bone morphogenetic protein,BMP-14)是多功能生长因子,它是机体生长发育的重要调节因子,其在诱导软骨形成,促进骨、软骨、肌腱韧带损伤修复方面均有重要作用。成纤维细胞生成因子(fibroblast growth factor,FGF)具有刺激软骨细胞增殖分化,导致有丝分裂原形态形成的作用。它是目前已知最强的促细胞生长因子。目的本实验研究BMP-14与bFGF单独及联合应用对体外培养大鼠关节软骨细胞增殖作用的影响,为探讨不同生长因子在软骨细胞体外增殖作用中的最佳组合及最佳浓度提供实验依据。实验方法体外分离与培养Wistar大鼠关节软骨细胞。取生长良好的第二代软骨细胞作为实验细胞分组后分布加入不同组合和浓度的生长因子。A组为空白对照组,各实验组根据BMP-14和bFGF浓度不同分15小组,共16组。各组BMP-14浓度分别取0ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml和各组bFGF浓度分别取0ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml。加入生长因子后第0,2,4和6天各组细胞计数,比较BMP-14和bFGF的增殖作用。用免疫细胞化学染色检测Ⅱ型胶原表达,并以图像分析软件进行半定量分析。用阿利新蓝法测定蛋白多糖表达。实验结果BMP-14单独作用即不能促进体外软骨细胞增殖,也不能促进软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达;bFGF单独作用即能促进外软骨细胞增殖,又能促进软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达;并且二者联合作用时促进作用更加明显,具有协同作用。结论本实验证实在软骨组织工程软骨细胞体外培养中联合应用BMP-14和bFGF促进软骨细胞增殖是一种可行的方法。