论文部分内容阅读
红松中富含有多种生物活性物质,具有重要的科学研究和实际应用价值。近些年来,红松生物活性相关的研究工作不断加强,但与活性物质代谢相关的研究还处于起步阶段。尤其是红松中多酚代谢活动相关研究还未完全开展。本课题研究了不同外源因素对红松代谢活动的影响,采用Folin-酚法测定红松中多酚含量,利用实时荧光定量PCR技术检测CHS基因的表达量,使用双向电泳技术和质谱技术进行蛋白质组学研究。主要取得如下成果:(1)研究了不同外源因素对红松多酚含量的影响。使用Folin-酚法测定多酚含量。研究发现:紫外照射时间为4h时,红松不定芽中多酚含量最,达到39.41mg/g;培养温度为20℃时,红松多酚含量最高,达到43.25mg/g,培养温度为10℃时,多酚含量达最低值21.37mg/g;不同季节红松松针多酚含量顺序:秋季>夏季>冬季>春季,秋季多酚含量为36.12mg/g,春季多酚含量为24.58mg/g。说明紫外光照、培养温度和季节都能对红松多酚的含量造成影响。(2)研究了不同外源因素对查尔酮合成酶基因表达的影响。采用RT-PCR技术检测红松中CHS基因的表达。研究发现,紫外、温度和季节都能影响CHS基因的表达:以紫外照射0h的实验组为内标,紫外照射2h时,CHS基因的表达量达最高值,为内标的3.87倍,紫外照射8h时,CHS基因的表达量降低至内标的0.16倍;以培养温度10℃的实验组为内标,培养温度为20℃时,CHS基因的表达量最高,为内标的3.10倍;不同季节红松松针CHS基因表达量顺序为:夏季>秋季>冬季>春季,以春季实验组为内标,夏季的CHS基因的表达量为内标的3.03倍。通过红松多酚含量和CHS基因表达量对比研究,发现基本变化规律:红松多酚含量随CHS基因的表达量升高而增加。(3)研究了不同外源因素对红松总蛋白表达的影响,通过双向电泳技术分离鉴定红松总蛋白。结果表明紫外光照、温度和季节对蛋白表达量影响较大,还出现一些蛋白点的极端缺失。从各组中选取差异显著蛋白点进行MALDI--TOF-MS分析:紫外实验组中ssp5701是核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶,ssp6501是蛋氨酸合成酶;温度实验组中ssp3804是热休克蛋白70,ssp7701为烯醇化酶;季节实验组中ssp4602是核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶活化酶,ssp3305是依赖脱落酸的水分胁迫诱导蛋白。