论文部分内容阅读
为了建立一种有效的诱导大苞栝楼发根的方法及其发根培养体系,以适合于发根生物反应器扩大培养研究和应用基础的需要;本研究对诱导发根的外植体在发根农杆菌和环境因子等影响作用下进行发根的诱发及其可能的机理进行探讨,从而找出用于发根诱导和培养的最佳外植体、预培养时间、发根农杆菌浓度、感染时间和共培养时间、诱导条件,并通过正交试验得出优化的诱导条件。本文以大苞栝楼无菌苗的子叶和茎作为诱导发根的外植体,以发根农杆菌R1601和R1000为诱导菌,利用不同的方法和在不同的条件下对大苞栝楼外植体进行发根的诱导,并对诱导出的发根进行冠瘿碱及天花粉蛋白等活性成分的检测,以确定发根诱导转化并建立发根培养体系。通过实验和对结果的数据分析,得出下面的结论:发根农杆菌R1601是较好的大苞栝楼发根的诱导菌株,它对预培养24h的大苞栝楼子叶外植体具有最好的转化效率和发根诱导率(60%),最适的菌株感染浓度OD600为0.7,温度27℃、pH值为6.0、20min的感染时间和48h的共培养,以及黑暗条件和1.0mg/L的激素最有利于发根诱导的环境条件。R1000也能比较有效的诱导大苞栝楼的发根,诱导活性却比R1601低。在某些条件下R1000也可以达到R1601同样的诱导活性,可以作为R1601的替代菌株。大苞栝楼发根诱导是感受态外植体的制备、发根农杆菌的活化过程和Ri质粒T—DNA的转移过程。所有的转化方法和诱导条件都是通过对上述的任一或者几个过程的作用,而最终影响发根的诱导率。