论文部分内容阅读
[目的]从形态学的角度探索在以二尖瓣狭窄为主要病变的风湿性心脏瓣膜病患者中,不同狭窄程度的二尖瓣中IL-35表达量的变化规律、病变瓣膜组织的不同部位中IL-35的表达差异,找寻IL-35在风湿性心脏瓣膜病瓣膜狭窄程度是否相关;观察外周静脉血单个核淋巴细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中调节性T细胞(Regulatory T cell,Treg)细胞和调节性B细胞(Regulatory B cell,Breg)在风湿性心脏瓣膜病患者中的变化情况,试图探索在风湿性二尖瓣瓣膜狭窄中产生IL-35的可能来源及二者之间存在的相关关系。为进一步探索调节性细胞因子IL-35在风湿性二尖瓣狭窄进展过程中的作用提供依据。[方法]在形态学实验中,我们选取以风湿性二尖瓣狭窄为主要病变的风湿性心脏瓣膜病患者为实验组,依据二尖瓣狭窄程度分为中度、重度二尖瓣狭窄两组,分别为19例和24例,先天性二尖瓣脱垂患者6例作为对照组,所有患者均行二尖瓣瓣膜置换手术或二尖瓣成形术。收集入组患者术后换下的病变瓣膜,根据不同部位分别采取四个不同位点的瓣膜组织,分别标记为P1、P2、P3和P4,应用免疫组化半定量和免疫荧光共定位方法分析实验组与对照组瓣膜组织IL-35的表达情况。另外,收集健康志愿者(n=6)和患者(n=8)外周静脉血,应用流式细胞技术,比较实验组和正常组外周静脉血中Treg和Breg的比例变化趋势。[结果]在风湿性心脏病患者免疫组织化学染色中可见,表达IL-35的两个亚基EBI3和p35的细胞可见细胞浆内有不同程度的棕褐色着色。在风湿性二尖瓣中度(n=5)、重度狭窄(n=4)及脱垂对照组(n=4)中,瓣膜不同部位之间(即P1、P2、P3、P4)EBI3和p35两个亚基的表达量均无统计学差异(p>0.05)。进而选取所有瓣膜组织的同一位点(P1)进行研究发现,在风湿性二尖瓣重度狭窄患者(n=24)、二尖瓣中度狭窄患者(n=19)及先天性脱垂患者(n=6)瓣膜组织中,EBI3 亚基的阳性率分别为 10.24±0.5755(%)、7.076±0.7798(%)、5.784±0.6455(%),重度狭窄组分别与中度狭窄组、脱垂组比较是显著升高的,P值分别为p1=0.0018<0.05,p2<0.0001,有统计学差异;而中度与脱垂组比较,p=0.2433>0.05,无统计学差异;重度狭窄、中度狭窄与脱垂组三组进行spearman’s等级相关分析,p<0.0001,具有相关关系。p35亚基的阳性率分别为10.90±0.8605(%)、6.630±0.4736(%)、6.129±0.5345(%),重度狭窄组分别与中度狭窄组、脱垂组比较是明显升高,P值分别为p1=0.0002<0.05,2=0.0005<0.05,有统计学差异;而中度与脱垂组比较,p=0.4942>0.05,无统计学差异;在重度狭窄、中度狭窄与脱垂组三组中进行spearman’s等级相关分析,p<0.001,具有相关关系。在流式细胞学检测发现,在RHD患者外周血PBMC中,Treg细胞和Breg细胞比例分别较正常组要升高,p1=0.0043<0.05(n=8),p2=0.0007<0.05(n=6),均具有统计学差异;且发现Breg细胞较Treg细胞增幅要显著(P<0.0001)。[结论]在风湿性二尖瓣狭窄为主要病变的患者,病变瓣膜上可见IL-35的表达,并随着瓣膜狭窄程度的加重,IL-35蛋白分子的表达量是增加的,呈正相关。但在同一瓣膜组织中四个不同位点(P1、P2、P3、P4)之间表达无差异。在风湿性二尖瓣狭窄患者外周血PBMC中,Treg和Breg细胞的比例分别较正常对照组增高,Breg细胞升高比例较Treg细胞显著。