【摘 要】
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目的:研究特发性膜性肾病（idiopathic membranous nephropathy,IMN）患者尿液外泌体中的miRNA表达谱,筛选IMN患者尿液候选生物标志物,并探讨其可能参与IMN的信号通路。方法:（1）收集右江民族医学院附属医院9例特发性膜性肾病患者（IMN）及9例健康体检者（NC）的尿液标本,分为筛选序列（IMN-A组,n=3;NC-A组,n=3）和确认序列（IMN-B组,n=6
【基金项目】
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国家自然科学基金（81860131）:miR-155 通过抑制IL-18/IL-18BP诱导足细胞焦亡促进狼疮性肾炎的作用机制研究；
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目的:研究特发性膜性肾病（idiopathic membranous nephropathy,IMN）患者尿液外泌体中的miRNA表达谱,筛选IMN患者尿液候选生物标志物,并探讨其可能参与IMN的信号通路。方法:（1）收集右江民族医学院附属医院9例特发性膜性肾病患者（IMN）及9例健康体检者（NC）的尿液标本,分为筛选序列（IMN-A组,n=3;NC-A组,n=3）和确认序列（IMN-B组,n=6;NC-B组,n=6）;（2）采用超速离心法提取筛选序列患者尿液外泌体,并对外泌体进行透射电镜观察、粒径分析鉴定,抽提外泌体RNA检测合格后构建尿外泌体小RNA文库;（3）通过miRNA-seq技术得到筛选序列患者的尿外泌体miRNA表达谱,按照表达变化2倍以上且P值小于0.05的筛选标准获得显著差异表达的miRNA;（4）应用生物信息学对差异表达的miRNA靶基因进行GO注释分析及KEGG信号通路分析,探讨其可能参与IMN的信号通路;（5）利用q RT-PCR在确认序列中验证目标miRNA,将目标miRNA与24h尿蛋白及血清白蛋白进行相关性分析,以期获得IMN患者尿液候选生物标志物。结果:（1）在筛选序列患者中共检测到2048个尿外泌体miRNA,发现48个miRNA表达差异显著（表达变化2倍以上且P值小于0.05）,其中36个表达上调,12个表达下调;（2）KEGG显著性富集分析发现差异miRNA靶基因主要参与MAPK信号通路、Wnt信号通路、胰岛素信号通路等信号转导途径;（3）根据变化倍数、表达量均值及文献检索结果,筛选出尿外泌体miR-184在确认序列患者中进行验证;（4）q RT-PCR验证结果显示,miR-184在IMN-B组患者尿外泌体中的表达高于NC-B组,差异具有统计学意义（P<0.05）,与测序结果一致;（5）相关性分析结果显示,miR-184与IMN-B组患者的血清白蛋白呈负相关（r=-0.814,P=0.049）。结论:（1）特发性膜性肾病患者尿液外泌体中miRNA的表达具有特异性,其中miR-184有可能成为IMN的候选生物标志物;（2）差异表达的尿外泌体miRNA靶基因可能参与MAPK信号通路、Wnt信号通路、胰岛素信号通路等信号转导途径来调节IMN的足细胞损伤过程。
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