论文部分内容阅读
目的:本课题通过高氧诱导的小鼠视网膜新生血管动物模型玻璃体内注入GM6001观察对视网膜PEDF表达的影响。方法:选取鼠龄为7天的SPF级C57BL/6J小鼠48只(96只眼),随机分为4组:正常组、高氧组、GM6001干预组和磷酸盐缓冲液对照组,每组12只。正常对照组鼠在正常空气环境中饲养,其余3组鼠置于氧箱中,建立高氧诱导的视网膜新生血管动物模型。在出生后第12天GM6001干预组幼鼠向玻璃体腔内注射GM6001μl,而磷酸盐缓冲液对照组注射相同体积的磷酸盐缓冲液,正常组和高氧组不做处理。各组小鼠均在出生后第17天处死。摘除左眼球制作石蜡标本,分别用抗PEDF和抗CD31抗体作免疫组织化学标记视网膜切片进行组织病理学观察;右眼剥离视网膜提取蛋白,采用ELISA法分析PEDF以及MMPS在视网膜中的含量。结果:高氧照组与正常组相比,视网膜组织可见大量突破内界膜的新生血管形成,炎症细胞浸润明显,说明视网膜新生血管动物模型诱导成功。GM6001治疗组和PBS对照组相比,突破视网膜内界膜的新生血管稀疏,管腔细小,生长面积明显缩小(P<0.01);免疫组织化学染色结果显示,在正常视网膜组织,PEDF在视网膜各层均有较强表达,呈棕黄色或棕色颗粒以神经节细胞层和神经纤维层表达最为强烈,在外核层也有表达;高氧组和PBS对照组PEDF的在视网膜各层的表达均减弱,只是在神经节细胞层和神经纤维层有较明显的表达;GM6001治疗组视网膜各层均有较强表达,与正常组表达相近。ELISA结果显示MMP-2,MMP-9,PEDF的含量正常组、GM6001组、PBS对照组及高氧组之间在统计学上均有差异P<0.01 GM6001组和正常组之间没有统计学差异P>0.05,高氧组和PBS对照组没有统计学差异P>0.05。在第17天时PEDF视网膜中的的含量GM6001组为PBS对照组的1.7倍,MMP-2视网膜中的含量GM6001组为PBS对照组的0.47倍,MMP-9视网膜中的的含量GM6001组为PBS对照组的0.36倍。结论:玻璃体内注入一定剂量的GM6001通过抑制基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9能够有效增强高氧诱导下的小鼠视网膜PEDF的表达并使新生血管的增长受到抑制。