【摘 要】
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研究目的本实验旨在探讨TLR4表达水平与COPD大鼠肺动脉平滑肌细胞合成分泌的关系。方法动物实验:建立大鼠COPD模型,HE染色判定模型建立,免疫组织化学染色观察对照组与模型组
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研究目的本实验旨在探讨TLR4表达水平与COPD大鼠肺动脉平滑肌细胞合成分泌的关系。方法动物实验:建立大鼠COPD模型,HE染色判定模型建立,免疫组织化学染色观察对照组与模型组肺动脉平滑肌层TLR4的表达。细胞水平实验:分离培养原代肺动脉平滑肌细胞,以TLR4的特异性抑制剂TAK-242为工具药,检测LPS诱导下COPD大鼠肺动脉平滑肌细胞TLR4表达水平与合成分泌的关系。实验分组为:对照组、LPS组、TAK-242组、LPS+TAK-242组,采用Western blot检测各组细胞中TLR4的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组原代细胞培养上清液中Th1细胞因子γ-干扰素(INF-γ)、Th2细胞因子(IL-6)及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍化生长因子(PDGF)的浓度,并进行相关性分析。结果正常大鼠肺组织平滑肌层有TLR4的表达,然而COPD模型组大鼠肺组织平滑肌层TLR4的表达明显高于正常大鼠;与对照组相比LPS组肺动脉平滑肌细胞中TLR4的表达明显升高(P<0.05),LPS诱导TLR4的表达升高明显增加PASMCs合成分泌INF-γ、IL-6、MCP-1、TGF-β1、PDGF的水平,TLR4的特异性抑制剂TAK-242阻断TLR4,PASMCs合成分泌INF-γ、IL-6、MCP-1、TGF-β1、PDGF的水平明显降低(P<0.05),COPD大鼠肺动脉平滑肌细胞TLR4表达水平与细胞培养上清液INF-γ、IL-6及MCP-1、TGF-β1、PDGF的浓度呈显著正相关(r=0.91、0.89、0.93、0.95、0.83,P<0.05)。结论LPS诱导可上调肺动脉平滑肌细胞中TLR4的表达。TLR4可能参与调控PASMCs的合成分泌功能。
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