金属硫蛋白(metallothioneins,MTs)是一种金属结合蛋白,具有维持生物体内金属含量动态平衡和重金属解毒双重作用机制。大量研究表明,MTs可作为重金属污染的生物标志物,预测生物体所暴露环境的重金属污染状况。目前,MTs已成为环境科学、生物毒理学、医学的研究热点之一。本文的主要研究内容如下:　　1:建立了分离纯化蚯蚓MTs的优化方法。采用正交试验设计及响应曲面分析研究了影响 MTs分离纯化效果的因素,并确定了 SephadexTMG-75葡聚糖凝胶色谱柱纯化MTs,DEAE SephadexTMA-25阴离子交换柱分离MTs亚型的最佳条件。在优化条件下,MTs的提取纯度高达90％。该分离纯化方法将各影响因素量化且获得较好重现性,为MTs含量的测定及其不同生物样品MTs含量的比较提供了依据。　　2:建立了荧光探针法测定蚯蚓体内金属硫蛋白的新方法。以洛美沙星-Eu3+络合物为荧光探针,在优化条件下,MTs的测量线性范围为0.08-20 mg/L,检出限为0.022 mg/L,回收率为91.9-104.4%。以酶联免疫吸附法为标准方法,该方法与示差脉冲极谱法相比,抗干扰能力更强,准确度更高,并成功将其用于蚯蚓体内MTs含量的测定。　　3:采用滤纸接触法探究锑诱导蚯蚓金属硫蛋白。以兔肝MTs为标准品,通过十二烷基聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析及紫外光谱扫描对诱导蛋白进行定性研究。Sb诱导蛋白分子量约为6～7 KDa,在268 nm有紫外特征吸收峰,与标品光谱性质一致。通过镉血红蛋白饱和法定量表明,随着Sb诱导浓度增加,MTs含量增加。实验表明Sb能够诱导蚯蚓产生MTs,MTs可以作为Sb污染的生物标志物。　　4:研究了蚯蚓 MTs是否可以作为土壤重金属(Zn、Cu、Cd、Sb、Pb)污染标志物。采用ICP-MS测定金属含量,银血红蛋白饱和法测定MTs含量。实验结果表明蚯蚓MTs诱导量与土壤中重金属的浓度对数正相关,二者的数量关系符合洛伦兹拟合模型。MTs对不同金属的响应浓度均低于二级土壤重金属含量标准,5种金属的响应浓度依次为CZn≈CCu