目的： 本研究通过观察VEGF-D在乳腺癌组织中的表达以及对体外培养人淋巴管内皮细胞增殖的影响，探讨其与乳腺癌淋巴道转移的关系以及可能的作用机制，同时比较VEGF-D与VEGF-C在乳腺癌淋巴管生成和淋巴道转移中的作用。 材料与方法： 1.收集临床手术切除、石蜡包埋的乳腺癌标本112例、癌前病变标本12例、正常乳腺组织标本10例，制成5μm厚连续切片，进行免疫组织化学染色(SP法)，观察乳腺癌组织中VEGF-D、VEGF-C、LYVE-1、CD31的表达情况，并与临床病理因素进行对比分析。染色结果用SPSS11.0软件包统计。 2.112例乳腺癌标本中8例同时取其术后新鲜组织，采用RT-PCR方法检测乳腺癌组织中VEGF-DmRNA的表达情况。 3.体外培养人淋巴管内皮细胞。取生长活力最旺盛的第3代细胞，调整细胞数为2×104/ml，加入96孔培养板，每孔100μl。实验分4组，每组6孔。细胞生长24h后，每孔各加入以下试剂100μl/孔。第1组为对照组：ECM；第2组：ECM+rhVEGF-D；第3组：ECM+rhVEGF-C；第4组：ECM+rhVEGF-D+rhVEGF-C。72h后每孔加入MTT，继续孵育4h，酶标仪490nm波长下测量每孔吸光度A值。以空白孔调零。实验重复进行3次。计算细胞增殖率，比较各组细胞增殖情况。 结果： 1.112例乳腺癌中有VEGF-D蛋白表达者85例(75.9％)，12例癌前病变中有VEGF-D蛋白表达4例(30.0％)，10例正常乳腺组织中则未检测到VEGF-D蛋白表达。VEGF-D蛋白在正常组织、癌前病变和肿瘤组织的表达依次增加，差异具有统计学意义(两两比较p＜0.05)。随着肿瘤大小、组织学分级的增加，VEGF-D蛋白表达亦相应增加，但VEGF-D蛋白表达与年龄因素无显著相关。 2.112例乳腺癌中有VEGF-C蛋白表达者93例(83.0％)，高于VEGF-D蛋白的表达(75.9％)(p＜0.05)。淋巴结转移率在VEGF-C单独表达组(7/13，53.8％)高于VEGF-D单独表达组(2/5，40.0％)(p＜0.05)。 3.112例乳腺癌组织中，VEGF-D与VEGF-C同时表达者80例，同时无表达者14例，另有13例VEGF-C表达而VEGF-D不表达，5例VEGF-D表达而VEGF-C不表达。淋巴结转移率在VEGF-D与VEGF-C同时表达组明显高于二者单独表达组或同时不表达组(p＜0.05)。 4.VEGF-D阳性指数在淋巴结转移组(60.42±16.26)明显高于未转移组(41.82±15.93)(p＜0.05)。VEGF-C阳性指数在淋巴结转移组(62.37±16.75)明显高于未转移组(43.56±15.64)(p＜0.05)。 5.乳腺癌组织淋巴管密度与VEGF-D、VEGF-C蛋白表达强度成正相关，随着VEGF-D、VEGF-C蛋白表达强度的增加，淋巴管密度也增加(前者r=0.864，p＜0.05；后者r=0.870，p＜0.05)。乳腺癌组织中淋巴管密度在VEGF-D、VEGF-C同时表达组显著高于二者单独表达组或同时不表达组。 6.乳腺癌组织淋巴管密度在淋巴结转移组(13.72±7.74)明显高于未转移组(7.69±5.85)(p＜0.05)。 7.培养的人淋巴管内皮细胞在加入rhVEGF-D、rhVEGF-C后均增殖活跃。培养72h后rhVEGF-D组增殖率为(53.8±7.07)％，rhVEGF-C组增殖率为(61.9±6.65)％，rhVEGF-D+VEGF-C组增殖率为(76.1±5.08)％，均与对照组有显著差别(p＜0.05)，各实验组间细胞增殖率均有明显差别(两两比较p＜0.05)。 结论： 1.VEGF-D蛋白在乳腺癌组织中呈高表达，其表达强度与乳腺癌肿瘤大小、组织学分级密切相关，提示VEGF-D的高表达在乳腺癌进展过程中起重要作用。 2.VEGF-D蛋白表达强度与乳腺癌组织淋巴管密度及淋巴结转移密切相关，体外细胞培养证明rhVEGF-D可促进人淋巴管内皮细胞增殖，提示VEGF-D可通过促进淋巴管生成而促进乳腺癌的淋巴道转移。 3.VEGF-D蛋白在乳腺癌组织中的表达率及其与乳腺癌淋巴管生成和淋巴结转移相关性均小于VEGF-C，提示VEGF-C在乳腺癌组织中促进淋巴管生成和淋巴道转移的作用更强。 4.体外细胞培养证实，同时加入rhVEGF-D、rhVEGF-C的人淋巴管内皮细胞的增殖率明显高于单独加入rhVEGF-D或rhVEGF-C组，免疫组化也显示VEGF-D、VEGF-C蛋白同时表达组乳腺癌组织淋巴管密度及淋巴结转移率均高于VEGF-D、VEGF-C蛋白单独表达组，提示二者在促进淋巴管内皮细胞增殖和乳腺癌淋巴道转移方面具有协同作用。