【摘 要】
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盐湖作为高盐的特殊生态环境,蕴藏着丰富的放线菌,具有从中发现新结构活性化合物的潜力,是获得药物的重要来源。本研究对通辽嫩江盐湖亚区及西藏盐湖亚区部分盐湖来源样品中放线菌资源开展了勘探,研究了可培养放线菌的多样性、稀有性、新颖性以及抗菌活性,为新抗生素发现奠定了基础。研究的对象为:从内蒙古通辽嫩江盐湖亚区4个盐湖采集的8份盐湖土壤样品;从西藏盐湖亚区5个盐湖获得的7份盐湖土壤样品。研究的方法为:1)
【基金项目】
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黑龙江省自然科学基金面上项目:申家店林区大型真菌多样性调查和经济菌株的筛选(C2017064); 中国医学科学院医学与健康科技创新工程服务“一带一路”战略先导科研专项:特殊环境中药用微生物资源发现与利用(Grant No. CAMS 2017-I2M-B&R-08;2017.01-2020.12); 科技部第8次中国-匈牙
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盐湖作为高盐的特殊生态环境,蕴藏着丰富的放线菌,具有从中发现新结构活性化合物的潜力,是获得药物的重要来源。本研究对通辽嫩江盐湖亚区及西藏盐湖亚区部分盐湖来源样品中放线菌资源开展了勘探,研究了可培养放线菌的多样性、稀有性、新颖性以及抗菌活性,为新抗生素发现奠定了基础。研究的对象为:从内蒙古通辽嫩江盐湖亚区4个盐湖采集的8份盐湖土壤样品;从西藏盐湖亚区5个盐湖获得的7份盐湖土壤样品。研究的方法为:1)采用纯培养方法,针对风干后的土样,采用5种分离培养基,2种p H,运用稀释涂布法和划线法,分离纯化放线菌;2)通过PCR扩增,获得纯菌株的16S r RNA基因并进行同源性比对,进而分析放线菌多样性;3)通过排重,选取代表性菌株进行24孔深孔板发酵,发酵液离心后,得到的上清液作为抗菌活性评价的测试样品;4)选择6种病原菌为检定菌,通过牛津杯法开展放线菌菌株发酵液的抗菌活性评价。结果为:1)从8份来自通辽嫩江盐湖亚区的4个盐湖土壤样品中,共分离纯化得到324株放线菌菌株,分布于9个目16个科25个属,链霉菌属(Streptomyces)菌株共86株,占所有放线菌菌株的27%,为放线菌优势菌属;其次是拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)菌株48株,占15%;涅斯捷连科氏菌属(Nesterenkonia)菌株43株,占13%,为该盐湖生境的相对优势菌属;并分离到种类丰富的微球菌科放线菌;2)从7份来自西藏盐湖亚区5个盐湖的土壤样品中,共分离纯化得到523株放线菌菌株,分布于6个目13个科27个属,链霉菌属(Streptomyces)菌株共169株,占所有放线菌菌株的32%,为放线菌优势菌属;其次是考克氏菌属(Kocuria)菌株64株,占12%;节杆菌属(Arthrobacter)菌株61株,占12%,为该盐湖生境的相对优势菌属;也分离到种类繁多的微球菌科放线菌;3)从分离得到的放线菌菌株数目和物种多样性来看,PYG培养基在所用的5种分离培养基中的分离效果最佳;4)12株菌株16S r RNA基因序列相似性较低(<98.70%),其中的潜在新物种率较高。选取2株相似率较低的放线菌进行克隆,所得结果构建系统发育树,发现菌株T17a6-2极有可能为柠檬酸球菌属(Citricoccus)新种菌株,S24c1-8极有可能为厄氏菌科(Oerskoviaceae)新属菌株;5)从通辽嫩江盐湖亚区选取72株放线菌进行发酵培养并开展抗菌活性评价,其中17株菌的发酵产物对至少一株检定菌表现出抗菌活性,阳性率为23.6%。从西藏盐湖亚区选取90株放线菌进行抗菌活性评价,其中33株菌的发酵产物对至少一株检定菌表现出抗菌活性,阳性率为36.7%。以上研究结果表明,通辽嫩江盐湖亚区与西藏盐湖亚区中不仅拥有大量放线菌资源,而且发现并获得稀有和新颖放线菌几率较大,具有从中发现新抗生素的潜力。
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