丹参总酚酸激活PKCε对心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究

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研究背景:冠心病作为临床上最常见的心血管疾病,是人类致死率最高的慢性疾病之一。经皮穿冠状动脉成形术(PTCA)和冠状动脉搭桥术(CABG)等治疗发展迅速,并得到了广泛的推广,但是同时存在着问题:心肌缺血后再灌注损伤严重影响了冠心病手术治疗后的临床疗效,需要我们重点关注,克服其影响。丹参作为活血化瘀的主要中药,是冠心病治疗的常用药,提取了丹参水溶性有效成分——丹参总酚酸,通过静脉给药的方式,验证丹参总酚酸对缺血再灌后心肌的保护作用。有研究表明在使用丹参后丹参总酚酸抑制炎性因子、减少氧自由基1,以保护心肌,通过实验分析丹参总酚酸是否激活心肌细胞内PKC-epsilon,干预心肌缺血再灌后HSP70表达的分子机制。通过分析丹参总酚酸保护心肌的分子机理,以明确其发挥作用的途径,为临床提供明确的用药依据。研究目的:1、了解心肌缺血再灌注损伤的发病机制,通过生化、病理等指标阐述丹参总酚酸静脉注射,对缺血再灌损伤后的心肌保护作用;2、探讨丹参总酚酸心肌保护作用的分子机制,进一步分析丹参总酚酸是否激活心肌细胞内PKC-epsilon,干预心肌缺血再灌后HSP70表达的分子机制,为临床提供明确的用药依据。材料与方法:健康成年wistar大鼠80只随机分别为正常组,模型组,给药组,阻断剂组,假手术组,每组10-15只。除正常组和假手术组外,其余各组实施在体心肌缺血再灌注手术,开胸结扎左冠状动脉,30min后松开结扎线。假手术组只穿线不结扎,给药组再灌注开始时给8mg丹参总酚酸,阻断剂组再灌注开始时给8mg丹参总酚酸,同时给5-HASS,按体重2ug/kg给药,再灌120min后开腹,取腹主静脉血,实验结束后取心脏,检测各生化、病理指标,western bloting蛋白印记法检测PKC-epsilon在心肌细胞内细胞膜及线粒体上的表达情况,以及HSP70在心肌细胞内的表达情况。实验数据使用SPSS16.0统计软件包进行统计分析。结果:1.心功能学和形态学研究结果:与模型组比较,给药组大鼠再灌后LVSP(左心室收缩压)升高(P<0.05),LVDP(左心室舒张压)下降(P<0.05),+dp/dt。(左心室收缩压最大变化率)升高(P<0.05),-dp/dtmax降低(P<0.05),再灌后心脏重量指数降低(P<0.05),心肌梗死区比例缩小(P<0.05),光镜和电镜的形态学改变轻于模型组,但重于假手术组,清中cTn-T(心肌肌钙蛋白T)以及TNF-α(瘤坏死因子-α)含量明显减少(p<0.05),血清及心肌组织中MDA(丙二醛)明显降低,SOD(超氧化物歧化酶)、T-AOC(总抗氧化能力)值明显升高,差异显著有统计学意义(P<0.05或P<0.01),各指标均有统计学意义。2.分子机制学研究结果:与模型组比较,给药组线粒体内PKC-epsilon(蛋白激酶C-Eplison)的含量明显上升,而胞浆内PKC-epsilon的含量明显下降,胞内HSP70(热休克蛋白)的含量明显升高,三个指标均有差异,有统计学意义(P<0.05)。结论:1.丹参总酚酸在一定程度上调节心律失常,改善心功能,有减小心肌缺血再灌住损伤梗死面积,改善心肌受损程度,维持心肌组织结构形态,增加了抗氧化酶,减少了氧自由基的生成,减轻炎性反应,以保护心肌细胞,抗心肌再灌注损伤。2.丹参总酚酸激活缺血再灌后心肌细胞内PKC-epsilon,并作用于线粒体,同时增加了胞内HSP70的表达,以保护心肌细胞。
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