黄瓜(Cucumis sativus L.)是我国重要的设施栽培蔬菜,干旱导致其生长发育延迟,产量严重下降,果实品质变差。遗传转化验证作为当今研究基因功能、现代分子育种的重要方法,建立一套稳定的黄瓜遗传转化体系可为运用过量表达等技术进行黄瓜功能基因组学研究提供技术支撑。本研究以黄瓜PIP2;4基因为研究对象,克隆了PIP2;4基因并进行了生物信息学分析和遗传转化研究,主要结果如下:(1)生物信息学表明,CsPIP2;4长852 bp,编码283个氨基酸,CsPIP2;4蛋白具有疏水性、无信号肽段、有跨膜结构,是定位在质膜的内在蛋白,以无规则卷曲和α-螺旋结构为主,具有典型的水通道蛋白结构功能域,属于MIP超家族;蛋白质同源比显示,CsPIP2;4与甜瓜PIP2;7的亲缘关系最近。q PCR结果表明CsPIP2;4表达受干旱诱导,可能参与干旱胁迫的调控。(2)构建了由Ca MV 35S启动子调控的表达载体p CAMBIA 2300s-PIP2;4;对黄瓜‘9930’不定芽和根诱导进行选择压的筛选,最佳筛选浓度为150 mg/L Kan,而‘新泰密刺’生根培养基的最佳浓度为100 mg/L Kan;共同培养后对外植体进行脱菌处理能抑制农杆菌大量繁殖,提高外植体存活率;不进行预培养可显著提高黄瓜抗性芽诱导率;分化培养基p H值为5.6时,可提高黄瓜外植体再生芽率;黄瓜‘新泰密刺’组培苗最佳生根浓度为0.5 mg/L IBA;生根培养基中添加MES与对照组相比,根系POD活性呈极显著性差异,叶片呈显著差异。采用优化后的遗传转化体系,以‘新泰密刺’为材料,过表达PIP2;4黄瓜植株的转化率为4.13%;以‘9930’为材料,过表达PIP2;4黄瓜植株的转化率为2.89%。本试验优化了黄瓜遗传转化体系,获得了过表达PIP2;4黄瓜转基因株系,为黄瓜遗传转化体系的优化和基因功能验证提供了基础。