论文部分内容阅读
背景:恶性脑胶质瘤是颅内最常见、最致命的恶性肿瘤。目前,恶性脑胶质瘤的治疗方法主要包括手术治疗、放疗和化疗等,治疗效果欠佳,大部分患者生存期没有明显提高,尤其是恶性程度最高的IV级脑胶质瘤患者五年生存率不超过5%,因此急需找寻更有效地治疗脑胶质瘤的方法。有研究表明,ATRX基因在基因转录、SCs自我更新和多能性状态维持,以及癌症发生发展中发挥着重要的作用。ATRX在GBM中经常存在突变,但ATRX在脑胶质瘤中发挥的作用和分子机制尚不清楚,因此需要进一步研究。目的:本研究选择GSCs和P53及Pten阴性的NSCs作为实验对象,利用sh ATRX对细胞进行转染,通过体内外实验分别检测敲减ATRX基因后对GSCs和NSCs增殖、分化和对GSCs/NSCs原位移植裸鼠模型中肿瘤增长及小鼠生存期的影响,证明ATRX可能是恶性脑胶质瘤的抑癌基因。方法:体内外实验分为sh Rluc.713组(阴性对照)和sh ATRX组(sh ATRX.6144和sh ATRX.7377)。(1)组织微阵列分析技术检测GBM中ATRX蛋白表达情况;(2)Western Blot实验检测转染sh ATRX对GSCs中ATRX蛋白表达水平的影响;采用细胞生长计数、软琼脂克隆形成实验和免疫荧光染色实验检测敲减ATRX对GSCs增殖的影响;(3)建立GSCs原位移植瘤裸鼠模型观察肿瘤生长情况及小鼠生存期,采用免疫组织化学染色实验检测敲减ATRX对小鼠肿瘤组织ATRX、Ki67和Nestin表达的影响。(4)Western Blot实验检测转染sh ATRX对NSCs中ATRX蛋白表达水平的影响;免疫荧光染色实验检测敲减ATRX对NSCs增殖和分化的影响;免疫组织化学染色实验检测敲减ATRX对NSCs分化和Nestin表达的影响。(5)利用NSCs建立原位移植瘤裸鼠模型观察肿瘤生长情况及小鼠生存期;免疫荧光染色实验检测敲减ATRX对小鼠脑神经干细胞增殖和分化产生的影响。结果:通过组织微阵列分析发现ATRX蛋白在GBM样本中低表达;体外实验结果显示在分化条件下,敲减ATRX表达能够促进GSCs生长和增强克隆形成能力;体内实验结果显示敲减ATRX表达促进GSCs原位移植瘤裸鼠模型肿瘤组织Ki67和Nestin表达增多,小鼠生存期缩短;体外实验结果显示在分化条件下,敲减ATRX表达能够促进NSCs的Brd U和Nestin表达增多;体内实验结果显示敲减ATRX表达显著地缩短了NSCs原位移植瘤裸鼠模型的生存期。结论:(1)敲减ATRX表达可促进GSCs增殖,维持GSCs干性,促进GSCs原位移植瘤裸鼠模型肿瘤增长并缩短小鼠生存期。(2)敲减ATRX的表达可促进P53及Pten阴性的NSCs恶化最终形成肿瘤。(3)ATRX通过抑制GSCs分化而促进细胞增殖的。(4)ATRX可能是恶性脑胶质瘤的抑癌基因。