研究背景:随着生活水平的提升及饮食习惯的不断变化,导致ALD发病率呈逐年上升趋势。西医目前主要从戒酒、营养支持和药物治疗两个方面治疗酒精性肝损伤,虽取得了一定的疗效,仍然存在作用较局限,难以提高患者的生活质量等不足。中医药治疗酒精性肝病能在治疗疾病的同时改善患者生活质量。我国地广物博,中药资源产量丰富,并且中药制剂毒副作用小、疗效佳、价格亲民,备受青睐,在现代解酒保肝产品开发中具有一定的优势。在追求大健康和治未病的时代背景下,中药类保健食品的研发也日益增多。因此,运用软件对CFDA网站公布的对化学性肝损伤有辅助保护功能保健食品配方特点进行归纳总结。此外,本人所在的课题组在已结题的中医药防治酒精性肝损伤四个课题的基础上选择2002年卫生部公布的药食两用名单中的中药,遵守“从脾论治”的原则,组成枳葛解酒保肝方,且以枳椇子、葛根为主药,研究枳葛解酒保肝方对酒精性肝损伤保护的作用机理。研究目的:通过对化学性肝损伤保健食品配方特点的归纳总结;以大鼠慢性酒精性肝损伤为模型探讨枳葛解酒保肝方对酒精性肝损伤的保护作用,从加速乙醇代谢和增强机体抗氧化能力角度,研究枳葛解酒保肝方对酒精性肝损伤保护的作用机理,为临床治疗酒精性肝损伤提供用药依据,并为保健食品的研发打下基础。研究方法:1.我国已批准的对化学性肝损伤有辅助保护功能的保健食品配方特点分析以国家食品药品监督管理总局——保健食品网站“数据查询”栏目已公布的保健食品信息为数据来源,并以“对化学性肝损伤有辅助保护功能”为关键词进行我国已批准的保健食品数据收集。对保健食品配方类型、剂型、保健功能、功效成分分别进行统计,将所得数据录入Microsoft Excel 2016进行频次分析。将组方中含中药原料的保健食品录入“中医传承辅助系统(V2.50)”分析用药规律。2.枳葛解酒保肝方对大鼠酒精性肝损伤的防治作用及机制探讨选择属于2002年卫生部公布的药食两用名单中的中药,组成枳葛解酒保肝方。选择雄性Wistar大鼠,随机分为空白组、模型组、阳性药组、枳葛解酒保肝方高剂量组、枳葛解酒保肝方中剂量组、枳葛解酒保肝方低剂量组。以浓度为50%的无水乙醇(蒸馏水稀释)灌胃6周,建立大鼠酒精性肝损伤模型,阳性药为东宝肝泰片,其余三组分别给予枳葛解酒保肝方对应剂量。分别检测肝脏指数,血清中ALT、AST、ALP、TP、ALB含量,肝组织病理形态,血清、肝组织中TG含量及肝组织脂滴面积,探讨枳葛解酒保肝方对酒精性肝损伤大鼠的保护作用。分别检测血清、肝组织中抗氧化相关指标如SOD、MDA、GSH,血液中乙醇浓度和ADH活性,探讨枳葛解酒保肝方对酒精性肝损伤大鼠的保护作用机制。研究结果:1.我国已批准的对化学性肝损伤有辅助保护功能的保健食品配方特点分析通过检索,共收集到325种保健食品,其中282种(86.8%)保健食品配方中含有中药类原料;具有单一保健功能的保健食品及两种功能的保健食品个数分别是192、133;剂型方面,胶囊剂156,约占总数的一半;最常用的5种功效成分分别是总黄酮、粗多糖、葛根素、总皂苷、牛磺酸;使用频次f ≥18的中药原料有21味,累积使用768次(73%),由高到低分别是:葛根、灵芝、五味子、枳椇子、丹参、枸杞子、茯苍、绞股蓝、黄芪、甘草、山楂、姜黄、陈皮、红景天、人参、栀子、西洋参、白芍、泽泻、三七、银杏叶;常用药物组合前5位有:①葛根、五味子,②葛根、枳椇子,③葛根、丹参,④葛根、灵芝,⑤丹参、五味子;通过软件中的新方分析功能获得9个新处方。2.枳葛解酒保肝方对大鼠酒精性肝损伤的防治作用及机制探讨与空白组比较,模型组大鼠肝脏指数、ALT、AST、TG、MDA、乙醇含量较空白组显著升高(P<0.01),ADH活性、SOD活性、GSH含量显著降低(P<0.01),肝组织病理形态出现明显病变,由此可知酒精性肝损伤模型复制成功。2.1枳葛解酒保肝方对大鼠酒精性肝损伤的防治作用枳葛解酒保肝方低剂量组大鼠的肝脏指数显著低于模型组,阳性药组、枳葛解酒保肝方高剂量组、枳葛解酒保肝方中剂量组与模型组相比较均无统计学意义。与模型组相比,阳性药组及枳葛解酒保肝方高、中、低剂量组血清ALT水平均有降低趋势;枳葛解酒保肝方中剂量组与模型组血清AST水平相比较有降低趋势。模型组大鼠血清中的ALP含量与空白组比较有上升趋势,但无统计学意义,模型组大鼠血清TP含量、ALB含量与空白组相比无差异。与空白组比较,其余五组在肝组织病理形态上均表现出一定程度的损害。枳葛解酒保肝方高、中、低三个剂量组与模型组相比,病理上均表现出一定的改善作用,顺序依次为枳葛解酒保肝方中剂量组优于枳葛解酒保肝方低剂量组/枳葛解酒保肝方高剂量组。与模型组比较,枳葛解酒保肝方中剂量组、低剂量组血清中TG有降低趋势;而枳葛解酒保肝方高剂量组、低剂量组肝组织中TG含量有降低趋势;枳葛解酒保肝方中剂量组肝组织中TG含量显著降低。阳性药组大鼠血清中TG含量较模型组显著下降,肝组织中TG与模型组相比具有降低趋势。与空白组大鼠肝组织脂肪变性评分比较,模型组升高;与模型组大鼠肝组织脂肪变性评分比较,阳性药组、枳葛解酒保肝方中剂量组降低。2.2枳葛解酒保肝方对大鼠酒精性肝损伤药效机制探讨与模型组相比,枳葛解酒保肝方中剂量组能提高大鼠血清GSH含量、提高SOD活力和降低肝组织中MDA含量;枳葛解酒保肝方高剂量组能显著降低大鼠肝组织MDA含量及提高GSH含量;枳葛解酒保肝方低剂量组能显著降低大鼠血清MDA含量。阳性药组大鼠血清中乙醇浓度较模型组降低,而肝组织中ADH活性较模型组升高;枳葛解酒保肝方高剂量组大鼠血清中乙醇浓度、ADH活性均较模型组降低,而肝组织中ADH活性较模型组升高;枳葛解酒保肝方中剂量组大鼠血清中ADH活性较模型组降低,而肝组织中ADH活性较模型组升高,血清中乙醇浓度较模型组有降低趋势;与模型组相比,枳葛解酒保肝方低剂量组大鼠血清中ADH活性降低,肝组织中ADH活性有升高趋势,血中乙醇浓度有降低趋势。研究结论:1.我国已批准的对化学性肝损伤有辅助保护功能的保健食品配方特点分析中药原料在对化学性肝损伤有辅助保护功能的保健食品中应用较为普遍,剂型的选择以服用方便、便于携带为主。最常用的5种功效成分分别是总黄酮、粗多糖、葛根素、总皂苷、牛磺酸。保健食品在中药原料的选择上与中医药理论治疗化学性肝病的原则基本相符,即解毒、扶正、活血祛瘀、清热、祛湿等。应用较多的是解酒毒药、补益药、活血化瘀药,清热药,利水渗湿药。通过软件挖掘的9个新处方还必须结合中医药理论与实践综合分析等进一步评判。2.枳葛解酒保肝方对大鼠酒精性肝损伤的防治作用及机制探讨2.1枳葛解酒保肝方对大鼠酒精性肝损伤的防治作用从肝脏指数来看,枳葛解酒保肝方低剂量组能够减少肝脏增生、充血、水肿等病变,有效的降低肝脏指数。从血清中ALT、AST可以看出,枳葛解酒保肝方具有缓解酒精引起的血清ALT水平升高的趋势;枳葛解酒保肝方中剂量组具有缓解酒精引起的血清AST水平升高的趋势。从HE病理切片染色情况来看,枳葛解酒保肝方高、中、低剂量组较模型组均表现出一定的改善作用,枳葛解酒保肝方中剂量组优于枳葛解酒保肝方低剂量组/枳葛解酒保肝方高剂量组。从血清、肝组织TG含量和肝组织脂滴情况可以发现,阳性药组、枳葛解酒保肝方具有一定减轻酒精性肝损伤脂肪变性程度的作用,其中以阳性药及枳葛解酒保肝方中剂量作用较优。2.2枳葛解酒保肝方对大鼠酒精性肝损伤药效机制探讨从SOD活性及GSH、MDA含量可知,枳葛解酒保肝方具有一定的增强SOD、GSH等内源性抗氧化酶的抗氧化能力,减缓氧自由基过多引起的脂质过氧化反应对肝脏的损害作用。从乙醇浓度及ADH活性可知,阳性药、枳葛解酒保肝方高剂量、枳葛解酒保肝方中剂量、枳葛保肝方低剂量组可能通过增强肝组织ADH活性,加速乙醇的代谢,从而减少肝脏的损害。综合上述指标可知,枳葛解酒保肝方对肝脏有一定的保护作用,其中枳葛解酒保肝方中剂量组保护作用较优。枳葛解酒保肝方发挥药效的作用机制主要从加速乙醇代谢和抗氧化两个方面概括。通过增强ADH活性,增强SOD、GSH等内源性抗氧化酶的活性,加速乙醇的代谢,减少氧自由基的产生,减少酒精对肝细胞膜及细胞器的损伤程度,纠正酒精引起的脂质代谢紊乱,调节体内脂质代谢,从而降低对肝细胞的损害。