热休克蛋白(Heat shock proteins,HSP)是一类在生物进化过程中高度保守的蛋白质,原核和真核细胞中都有存在。在正常情况下,HSP参与一些重要的维持细胞正常结构和功能的生理活动。结核杆菌的65kD热休克蛋白是卡介苗的主要抗原成分之一,该蛋白质可诱导和增强机体体液免疫和细胞免疫的发生。结核杆菌在感染人体时HSP65会高表达,并被机体的免疫系统识别,因此HSP65具有免疫优势抗原的特性。有实验证明HSP65作为分子载体,具有很高的安全性和佐剂作用。 为得到抗HSP65单克隆抗体,本实验应用杂交瘤细胞技术将小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0和经HSP65抗原免疫的BALB/c小鼠的脾细胞融合,并经过间接ELISA法检测和有限稀释法克隆培养,得到了5株能持续分泌抗HSP65单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对这几株细胞及其所分泌抗体的活性、稳定性、特异性进行了检测,对所分泌抗体的亚型进行了鉴定分析。并对其中10B12株所分泌的抗体用辣根过氧化物酶标记,进行了初步的应用。 实验结果显示,其中的4株杂交瘤细胞所分泌的单抗具有较高的生物活性和特异性,并在酸、碱、高、低温等环境因素中基本保持稳定。4G2、10B12的抗体亚型为IgG2a/κ,6C7、7F4、13C8的抗体亚型为IgG1/κ。 此杂交瘤细胞系建立后,将可以得到抗HSP65单克隆抗体,为进一步研究HSP65的生物活性奠定基础,并可用于建立一个对HSP65及其复合物进行有效检测和分离纯化的平台,在科学研究和实际应用中发挥重要作用。