脓毒症与四连接素的相关性研究

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背景:  脓毒症是机体对感染的反应失调而导致危及生命的器官功能障碍。脓毒症的本质是由病原微生物引起的,伴有其他有害刺激因素参与的对机体造成严重损害的过度炎症反应。脓毒症是因宿主对感染的反应失调导致的,这种反应失调不仅反应在促炎和抗炎反应失调,免疫失衡,还表现为凝血功能紊乱。在脓毒症发病过程中凝血、纤溶、炎症相互影响,导致抗凝物质减少,凝血活化,血小板活化和内皮细胞功能障碍,使组织型纤溶酶原激活物(Tissue plasminogen activetor,tPA)产生减少、纤溶抑制物增多,因此脓毒症弥漫性血管内凝血(Disseminated intravascular coagulation,DIC)时纤溶受到抑制。  四连接素(tetranectin,TN)对纤溶酶原的Kringie4区有特殊的亲和性,能够与纤溶酶原结合激活纤溶酶原转变为纤溶酶,促进溶血。因此我们目前推测TN参与了脓毒症凝血功能紊乱的发病过程。  目的:  通过Western Blotting实验检测TN在正常人、肺炎患者、脓毒症患者血浆中的表达水平;检测TN在正常小鼠血浆、肾脏、肺脏、肝脏、脾脏、心脏、脑组织匀浆液中的表达水平;检测TN在盲肠结扎穿孔法(The cecal ligation and perforation,CLP)脓毒症小鼠模型血浆、肺脏组织匀浆液中的表达水平。有望为脓毒症的诊断与治疗提供有价值的依据。  研究方法:  1.研究对象的选择:采用前瞻性、随机、临床对照研究(RCT)方法,选择2016-09-22至2016-12-02在河南大学淮河医院体检科的正常人;2016-09-22至2016-12-02在河南大学淮河医院呼吸与危重症科的肺炎患者和脓毒症患者;正常小鼠;CLP脓毒症小鼠模型。  2.研究分组:  (1)体检科正常人:正常人5例作为对照组,其中男 5例,女 0例;年龄 42~ 80岁平均年龄在58.4±2.9岁。  (2)肺炎患者:选取肺炎患者6例,其中男6例,女0例;年龄40 ~ 80岁,平均年龄在59.6±4.6岁。  (3)脓毒症患者:选取脓毒症患者8例;其中男 8例,女0例;年龄 45-80岁,平均年龄60±7.9岁;脓毒症患者 SOFA 评分 1 ~ 6分 3 例,7 ~ 12 分 3例,13 ~ 18 分 1例,19 ~ 24 分 1例。(4)选择BALB/c雄性,7-8周正常小鼠1只;CLP脓毒症小鼠模型21只。  3.排除标准  3.1.脓毒症患者排除标准:  (1)年龄<18岁;  (2)妊娠及哺乳期妇女;  (3)有免疫系统疾病者;  (4)HIV阳性者;  (5)肝脏或肾脏功能衰竭者;  (6)入住 RICU<48 小时者;  (7)前6 个月内接受化疗者;  (8)目前或前 3 个月接受糖皮质激素或其他免疫调节剂、免疫抑制剂治疗者。  3.2.肺炎患者排除标准:  (1) 肺结核;  (2)肺部肿瘤;  (3)非感染性肺间质性疾病;  (4)肺嗜酸性粒细胞浸润症。  (5)肺血管炎;  (6)肺不张;  (7)肺水肿;  (8)肺栓塞。  4.入选标准:  (1)社区获得性肺炎指南(2016版);  (2)脓毒症指南 3.0(2016版)。  5.实验标本:  (1)正常人血浆标本;  (2)肺炎患者血浆标本;  (3)脓毒症患者血浆标本;  (3)正常小鼠血浆、肺脏、肝脏、心脏、脾脏、肾脏、脑组织标本。  (4)0h、2h、6h、12h、24h、48h、72hCLP脓毒症小鼠模型的血浆、肺脏组织标本。  6.实验目的:通过Western Blotting实验检测TN在实验标本中的表达水平。  7.最后数据分析采用均数±标准差( x?s )表示,在不同时间点取不同组的样品数据,用SPSS 22.0等软件对结果进行统计分析,单因素方差分析,重复测量方差分析,P<0.05被认为有统计学意义。  结果:  1.TN 在人血浆中的表达水平结果示:正常人最高,肺炎患者次之,脓毒症患者最低,(P<0.05有统计学意义)。  2.TN在正常小鼠脏器中的表达水平结果示:TN在肺脏组织匀浆液中的表达水平较肝脏、肾脏、脾脏、心脏、脑组织匀浆液中的表达水平明显高。  3.TN在CLP脓毒症小鼠模型肺脏组织匀浆液中表达水平结果示:在0h、2h表达水平有升高,在6h、12h的表达水平逐渐下降,在24h 、48h、72h时表达水平逐渐升高。  4.TN在CLP脓毒症小鼠模型血浆中的表达水平结果示:在0h、2h、6h的表达水平逐渐降低,12h较24h的表达水平高, 24h、48h、72h的表达水平逐渐升高。  结论:  1.TN在脓毒症患者血浆中的表达水平下降。  2.TN在正常小鼠脏器中,肺脏组织匀浆液中表达水平最高。  3.TN在CLP脓毒症小鼠模型肺脏组织匀浆液中24h、48h、72h的表达水平与血浆标本中的表达水平基本一致。  4. TN在CLP脓毒症小鼠模型血浆中24h、48h、72h的表达水平逐渐升高推测是肺脏合成导致的。
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