蜈蚣草多糖和黄酮的提取及抑菌活性研究

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蜈蚣草是蕨类植物中的一种,全草或根状茎可入药,全年可采。用于防治流感、痢疾、风湿疼痛、跌打损伤。黄酮是蕨类植物所含化学成分中较多的一种,有很强的生物活性,在医药、食品添加剂上具有广泛用途。目前蜈蚣草的研究多局限在环境治理方面,对其有效成分的提取、纯化及其功能性研究报道较少。为此,我们深入研究蜈蚣草的有效成分多糖和黄酮的提取工艺、黄酮的纯化工艺、多糖及黄酮抑菌活性,为蜈蚣草的全面开发提供理论支持。1、采用植物化学成分系统预试法,初步推测蜈蚣草中的有效成分,利用颜色反应专项检验发现蜈蚣草提取物中可能含有黄酮、黄酮醇、异黄酮类化合物。其紫外吸收光谱特征与异黄酮的谱图相似,据此可推测蜈蚣草水提物的黄酮类化合物可能为异黄酮;通过加入位移试剂得到的紫外光谱的对比分析,可以确定该黄酮母核结构中,4’位和3位上有羟基,且A、B环均无邻二酚羟基。2、采用水提醇沉法提取蜈蚣草多糖,由响应面中心组合设计得出最佳工艺条件为:提取温度90℃,提取时间4h,液料比1:25,蜈蚣草多糖提取率为3.78%。红外光谱研究发现蜈蚣草多糖具有一般多糖类物质的特征吸收峰,同时多糖结构中存在吡喃环。3、对霉菌发酵产纤维素酶的两种发酵方式(液体发酵和固体发酵)进行了研究和比较。结果表明:固体发酵产酶量多,在设备、耗能、生产成本方面比液体发酵优越得多。固体发酵产酶时,最佳发酵菌种为黑曲霉,最佳发酵条件为:稻草粉与麸皮的质量比为6:4,调节初始培养基pH4.0,接种量为20%,黑曲霉产纤维素酶的CMC酶活达到最高为3.47U/ml,FPA酶活为2.34U/ml。用霉菌发酵制备的粗酶液辅助提取蜈蚣草黄酮能有效的提高黄酮的提取率,最优的工艺条件为:蜈蚣草质量与酶液体积比为1:40、提取温度50℃、提取时间1h,蜈蚣草黄酮提取率为7.9%,比空白对照组提高了16.2%。4、选择4种大孔吸附树脂对蜈蚣草黄酮进行吸附和解吸,最优吸附剂为D101大孔树脂;最佳纯化工艺参数为:上样液pH值为5,上样流速为1ml/min,洗脱液流速为1ml/min,洗脱液为浓度为60%的乙醇。上样液浓度为4.02mg/ml,纯化后,蜈蚣草黄酮浓度为14.71mg/ml,达到良好的纯化效果。5、蜈蚣草黄酮对金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌有较强的抑制作用,但对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、米曲霉、绿色木霉等均无抑制作用;蜈蚣草乙酸乙酯层黄酮对供试菌的最低抑制浓度为:金黄色葡萄球菌亚种2.443mg/ml;金黄色葡萄球菌4.886mg/ml;副溶血性弧菌4.886mg/ml。正丁醇层黄酮对供试菌种的MIC为:金黄色葡萄球菌亚种5.064mg/ml;金黄色葡萄球菌10.127mg/ml;水提取黄酮对金黄色葡萄球菌亚种、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧的MIC均为5.663mg/ml。正丁醇黄酮和水提取层黄酮的抑菌受pH的影响较小,在酸性条件下抑菌活性较高。金属离子对抑菌活性的影响较大,经Fe3+处理后的黄酮抑菌活性均降低,水提取黄酮在Ca2+处理后,对副溶血性弧菌的抑制效果增强。蜈蚣草黄酮对紫外线不稳定性,随照射时间延长,蜈蚣草黄酮的抑菌活性减弱。蜈蚣草多糖对几种供试菌种均无抑菌效果。
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