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目的:观察Survivin及其剪接变异体Survivin-△Ex3、Survivin-2B mRNA在大肠正常组织、腺瘤、高分化癌及中低分化癌中的表达规律;探讨其在大肠癌的发生、发展中的作用。
方法:随机收集我院(泸州医学院)2008年3月至2008年12月手术切除新鲜大肠组织标本92例,经病理证实大肠正常组织18例,大肠腺瘤16例,大肠癌高分化28例,中低分化30例。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测92例组织标本中Survivin及其剪接变异体Survivin-AEx3、Survivin-2B mRNA的表达,所有标本用GAPDH mRNA作为内对照,目的PCR条带用BIO-RAD Quantity4.5软件根据面积与吸光度定量分析;采用免疫组化SP法及图像分析技术,检测Survivin蛋白在不同大肠组织中的表达情况。采用SPSS13.0 for windows软件统计分析。
结果:①Survivin mRNA在大肠正常组、大肠腺瘤组、大肠癌高分化组及大肠癌中低分化组表达阳性率分别为0%、43.8%、53.6%、90.0%,随分化程度的降低表达阳性率呈上升趋势;大肠正常组与大肠腺瘤组之间Survivin mRNA表达阳性率有显著差异(P<0.01);大肠癌高分化组及大肠癌中低分化组之间Survivin mRNA表达阳性率具有显著差异(P<0.01);②Survivin-AEx3 mRNA在大肠正常组、大肠腺瘤组、大肠癌高分化组及大肠癌中低分化组表达阳性率分别为0%、0%、14.3%、46.7%,随分化程度的降低表达阳性率呈上升趋势;大肠腺瘤组与高分化组之间Survivin-△Ex3 mRNA表达阳性率具有显著差异(P<0.01);大肠癌高分化组与大肠癌中低分化组Survivin-△Ex3 mRNA表达阳性率具有显著差异(P<0.01);其相对Survivin-AEx3 mRNA水平分别为:0、0、0.080±0.039、0.119±0.005,表达水平呈上升趋势;③Survivin-2B mRNA在大肠正常组、大肠腺瘤组、大肠癌高分化组及大肠癌中低分化组表达阳性率分别为:0%、37.5%、30.0%、23.30%,随分化程度的降低表达阳性率呈下降趋势;其相对Survivin-2B mRNA水平分别为:0、0.367±0.006、0.288±0.003、0.143±0.004,表达水平呈下降趋势;大肠腺瘤组与高分化组比较,以及高分化组与中低分化组比较,相对Survivin-2B mRNA水平均有显著差异(P<0.01);④58例大肠癌组织(高分化28例,中低分化30例)中,仅表达Survivin mRNA者占29.3%(17/58);Survivin mRNA和Survivin-△Ex3mRNA同时表达mRNA的占17.2%(10/58),Survivin mRNA和Survivin-2BmRNA同时表达的12.1%(7/58),Survivin mRNA、Survivin-△Ex3 mRNA和Survivin-2B mRNA三者同时表达的占13.8%(8/58)。⑤Survivin蛋白在正常大肠组织中呈阴性表达,在大肠腺瘤组、大肠癌高分化组、大肠癌中低分化组中的表达阳性率分别是37.5%(6/16)、53.6%(15/28)、86.7%(26/30),表达阳性率逐渐增高;大肠正常组与大肠腺瘤组比较、大肠癌高分化组及大肠癌中低分化组比较,Survivin蛋白的阳性率相比均有差异(P<0.01);Survivin蛋白在大肠正常组、腺瘤组、大肠癌高分化组、大肠癌中低分化组中平均光密度值(MOD)分别是:0、0.219±0.136、0.390±0.198、0.442±0.024。
结论:①Survivin mRNA和Survivin蛋白在大肠癌中高表达,提示Survivin在大肠癌的发生、发展过程中具有重要作用,可望作为大肠癌早期诊断和治疗中的新靶点,及大肠癌发生、发展的生物学指标。②结果提示Survivin-△Ex3可能具有抗凋亡作用,促进肿瘤的发展;提示Survivin-2B促凋亡,可能具有保护作用。③Survivin及其剪接变异体Survivin-△Ex3,Survivin-2B mRNA的表达情况,提示有Survivin-△Ex3mRNA和(或)Survivin-2B mRNA表达者均有Survivin mRNA表达;Survivin mRNA不表达的病例Survivin-AEx3 mRNA和(或)Survivin-2B mRNA均不表达。