【摘 要】
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人NDRG2(human n-myc downstream regulated gene2，hNDRG2)基因属于NDRG家族(包括NDRG1、NDRG2、NDRG3、NDRG4)为第四军医大学首次发现，已被Genbank收录，登陆号为AFI59092，经原位
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人NDRG2(human n-myc downstream regulated gene2，hNDRG2)基因属于NDRG家族(包括NDRG1、NDRG2、NDRG3、NDRG4)为第四军医大学首次发现，已被Genbank收录，登陆号为AFI59092，经原位杂交实验证实，NDRG2 mRNA在正常组织内广泛表达，并在部分肿瘤组织中存在差异表达，推测其与细胞的增殖分化有关，可能抑制多种细胞的增殖，但是对这个基因的准确的作用机理和方式还有待于研究。 RNA干扰(RNAi，RNA interference)是近年来发现的一种序列特异的转录后基因沉默现象，是指双链RNA(dsRNA)进入细胞后被加工成双链的小干扰RNA(siRNA)，siRNA通过特异的降解mRNA来抑制特异基因的表达。在植物，昆虫，原生动物体内都发现了自然存在的RNA干扰，对于生物体有重要作用。RNA干扰具有特异、高效、持久的特点，是抑制细胞中某个基因表达，研究未知基因功能的有力工具。 本实验的研究目的是初步探讨NDRG2在人肿瘤细胞HHCC和SGC-7901中的作用。实验的总体思路是：通过质粒转染的方法在细胞内引起NDRG2表达的升高和降低，然后分别检测NDRG2表达升高和降低对细胞的影响，并以此为基础，研究NDRG2在HHCC和SGC-7901细胞中的作用。 本实验共分为三部分，第一部分是构建NDRG2表达质粒和NDRG2干扰质粒：NDRG2表达质粒是通过把NDRG2 cDNA连接到pSNAV质粒上得到的；NDRG2干扰质粒是通过把shRNA(short harpin RNA)表达框架连接到pSNAV质粒上得到的，shRNA表达框架是针对NDRG2 mRNA设计的，它转录形成的shRNA能够引起针对NDRG2的特异的RNA干扰，抑制NDRG2的表达。 第二部分是转染构建的质粒，检测肿瘤细胞NDRG2表达水平的变化。将第一部分构建的质粒转染HHCC和SGC-7901细胞，用RT-PCR、荧光定量PCR和免疫印迹等方法检测细胞中NDRG2表达水平的变化。结果证明NDRG2表
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