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乌药是樟科植物乌药linderaaggregatea(Sims)Kosm-term的干燥块根。主要作用有行气止痛,温肾散寒。在2020版《中国药典》中以去甲异波尔定作为乌药含量测定的成分,但单一含量的测定不足以反映乌药整体的质量情况。乌药的炮制品研究主要集中在醋制,对乌药及其炮制品的物质基础差异研究一般只涉及到几个有效成分,不够系统全面,对乌药的炮制机理方法研究就更少,故基于代谢组学技术研究乌药炮制前后的异喹啉型生物碱差异,对于研究乌药炮制前后物质基础的变化,提升乌药质量标准,扩大临床应用,具有重要意义。目的:一.研究乌药中异喹啉型生物碱的裂解规律。二.筛选乌药炮制前后的差异代谢物。三.研究乌药炮制前后的异喹啉型生物碱的差异。方法:1.液相使用WatersACQUITYUPLCREHC_(18)色谱柱(1.7um,2.1×100mm),质谱采用电喷雾离子源,WatersXevoG2-XSQTOF飞行时间质谱仪。采用时间依赖型质谱扫描模式(MS~E)采集模式,对异喹啉生物碱对照品分析,结合参考文献和数据库,同时依据一级质谱精确质荷比和二级质谱碎片,研究异喹啉生物碱的裂解规律。2.对乌药进行炒制、醋制、酒制和盐制,每一种制法重复10次,分别进行液质分析,利用markerlynx提取分子离子峰匹配和归一化处理后,得到有保留时间、分子离子峰归一化之后的峰强度的表格,再将表格数据导入SIMCA-P14.1用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)进行模式识别和分析。3.结合1中研究总结的裂解规律,鉴定混合样品中两类异喹啉生物碱,用质谱自带软件quanlynx对生品和炮制品中两类生物碱的峰面积进行提取,比较生品与炮制品生物碱含量差异。结果:1.根据一级、二级质谱,结合参考文献,乌药中主要的阿朴菲类生物碱可以分为三类,去甲异波尔定型,六驳碱型,紫堇碱型,由于含有相同的结构骨架,可以产生共有的碎片离子177.0704,再结合碎片离子297.1227、311.1283、295.0970可以对这三类主要阿朴菲类生物碱进行鉴定。苄基异喹啉型生物碱可以分为网脉碱性,乌药碱型,Karakorine型,N-甲基去甲乌药碱-7-o-β-D-吡喃葡萄糖苷型,苄基异喹啉型生物碱的部分裂解规律与阿朴菲类生物碱类似,由于可以发生α裂解,可以产生143.0497的特征离子,结合碎片离子299.1289、269.1178、391.1545、255.1021可以对这四类主要的苄基异喹啉型生物碱进行快速的鉴别。2.利用非靶标性代谢组学,进行主成分分析,显示炮制品各组与生品均有很好的区分,利用正交偏最小二乘判别分析,设置VIP值大于1.5,共鉴定出48个差异性化合物,其中含有39个异喹啉型生物碱,占绝大多数。3.利用靶标性代谢组学,结合裂解规律,共鉴定出68个化合物,其中生品中含有59个异喹啉生物碱,炒乌药含有61个异喹啉生物碱,醋乌药含有62个异喹啉生物碱,酒乌药含有42个异喹啉生物碱,盐乌药含有44个异喹啉生物碱,对含量进行t检验,大部分生物碱含量有显著差异。通过实验结合文献总结了乌药中异喹啉型7类生物碱的裂解规律。首次运用UPLC-QTOF-MS/MS技术,非靶标代谢组学技术结合靶标性代谢组学的策略,鉴定乌药炮制前后48个差异代谢物,其中异喹啉型生物碱占绝大多数。首次建立乌药及其炮制品所含异喹啉生物碱的特征轮廓谱,对乌药及其炮制品所含异喹啉生物碱进行了全面表征,首次从定性定量两方面比较了乌药生品与不同炮制品异喹啉型生物碱成分的差异,为乌药炮制机理方法研究和乌药及含乌药制剂的质量控制提供一定的科学依据,为乌药不同炮制方法引起的药效差异研究奠定了基础。