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第一部分:人工养殖对虾可培养细菌数量及组成分析。为深入了解人工养殖条件下养殖对虾肠道内菌群结构和携带病毒情况,本部分应用常规细菌分离、培养与纯化,细菌16Sr DNA序列分析的方法分析了我国山东、江苏、韩国不同养殖场的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)和中国明对虾(Fenneorpenaeus chinensis)肠道内可培养细菌的总数、优势菌组成和数量,并用巢式聚合酶链式反应(Nested polymerase chain reaction,Nested PCR)方法检测对虾携带病毒情况。结果显示各批次凡纳滨对虾和中国明对虾对虾样品肠道内的可培养细菌总数在105-109cfu/g之间,并对分离出的优势菌进行属(种)鉴定,结果表明这些优势菌分别属于乳球菌属(Lactococcus sp.)、弧菌属(Vibrio sp.)、芽孢杆菌属(Bacillus sp.)、发光杆菌属(Photobacterium sp.)、希瓦氏菌属(Shewanella sp.)、节杆菌属(Arthrobacter sp.)、微小杆菌属(Microbacterium sp.)。凡纳滨对虾和中国明对虾均有样品检测为WSSV阳性,6批次WSSV阳性对虾样品中均检测到弧菌属细菌,占可培养细菌比例为33%-93.58%。2批次WSSV阳性对虾样品中检测到希瓦氏菌属细菌,占可培养细菌比例为21.67%-34.21%。4批次WSSV阳性对虾样品中检测到发光杆菌属细菌,占可培养细菌比例为21.03%-66.83%。第二部分:抗哈维氏弧菌芽孢杆菌的筛选及其效果的研究。采用滤纸片法和共培养的方法筛选出4株芽孢杆菌对哈维氏弧菌有明显拮抗作用。4株芽孢杆菌的编号分别为2012070203、2011120601、20110910012和2013103110,由本实验室分离鉴定保存。对4株芽孢杆菌进行16Sr DNA序列分析,分析相关细菌相应序列的同源性,构建系统发育树。结合细菌表型特征以及16Sr DNA序列分析最终鉴定结果为:2012070203为蜡样芽孢杆菌,2011120601为地衣芽孢杆菌,20110910012为短小芽孢杆菌,2013103110为巨大芽孢杆菌。将4株已鉴定的芽孢杆菌分别添加到饲料中,配制成4种实验饲料,投喂凡纳滨对虾21d后,注射哈维氏弧菌5.98×106cfu/ml观察14d,14d后对照组的累计死亡率为100%,蜡样芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌实验组的累计死亡率分别为91.11%和95.55%,与对照组无显著差异(P>0.05)。地衣芽孢杆菌和短小芽孢杆菌实验组的累计死亡率分别为77.78%和84.44%,显著低于对照组(P<0.05)。第三部分:1株地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肠道菌群和非特异免疫基因表达量影响的研究。实验对虾和感染实验同第二部分,其中对照组每日投喂普通商品饲料,实验组每日投喂在普通商品饲料中添加地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)1.0×108cfu/ml配制成的实验饲料。养殖期间每7d取样,分析对虾肠道总菌数和弧菌数的变化。感染哈维氏弧菌后0h、6h、12h、18h、24h、36h、48h、72h和7d取样,分析地衣芽孢杆菌对凡纳滨对虾溶菌酶(Lysozyme,Lzm)和Toll受体(Toll receptor)m RNA的相对表达量的影响。实验结果表明,与对照组相比,实验组可显著降低对虾肠道内弧菌数量(P<0.05)。感染哈维氏弧菌后,实验组溶菌酶m RNA的相对表达量在12h、18h、24h、36h、48h、72h均显著高于对照组(P<0.05)。实验组感染哈维氏弧菌后在6h、12h、18h、24h、36h、48h、72h、7d的Toll受体m RNA的相对表达量均显著高于对照组(P<0.05)。第四部分:饲料添加单一或复合益生菌对凡纳滨对(Litopenaeus vannamei)抗副溶血弧菌(Vibrio parahaemolytics)感染能力影响的研究。将地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌+枯草芽孢杆菌(1:1)添加到基础饲料中,配制成的3组实验饲,实验饲料益生菌的终浓度为107cfu/g。投喂凡纳滨对虾21d后,注射感染副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus),感染剂量为1.0×106cfu/ml,感染14d后统计各组的累计死亡率。14d后对照组的累计死亡率为100%,地衣芽孢杆菌实验组的累计死亡率为73.34%,枯草芽孢杆菌实验组的累计死亡率为77.78%,地衣芽孢杆菌/枯草芽孢杆菌复合实验组的对虾累计死亡率为68.89%,三个实验组的累计死亡率均显著低于对照组(P<0.05)。实验结果表明饲料中添加芽孢杆菌可以提高凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染的能力,且复合益生菌的使用效果要优于单一益生菌。第五部分:饲料添加复合益生菌对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)非特异免疫基因表达水平的影响。对虾的养殖和饲料的制备同第四部分,感染副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)后0h、6h、12h、18h、24h、36h、48h、72h和7d取样,采用实时荧光定量PCR方法,对保护率最高的地衣芽孢杆菌+枯草芽孢杆菌实验组进行凡纳滨对虾相关免疫基因表达水平的分析。实验结果表明,感染副溶血弧菌后,地衣芽孢杆菌+枯草芽孢杆菌组凡纳滨对虾血淋巴中的IMD、penaiedin 3a、pro PO、LZM和Crustin的m RNA的相对表达量均显著上调,且分别在18-24h达到最大值。实验结果提示:饲料中添加地衣芽孢杆菌可有效提高凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染的能力,这种能力的提高可能是增加了抗病相关基因的表达量实现的。