蜗牛肝脏木葡聚糖酶的分离与纯化

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dingdang7456
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术葡聚糖酶是水解木葡聚糖的酶。它广泛存在于自然界的细菌、真菌和软体动物中。在饲料、食品、制药行业具有良好的应用前景,己被国内外同行重点关注,并取得一些重要研究进展。   本文以蜗牛肝脏术葡聚糖酶为研究对象,研究了该酶的提取、分离、纯化、鉴定及部分理化性质,为蜗牛木葡聚糖酶序列测定、基因克隆和单克隆抗体的制各提供了基础性技术支持。   蜗牛胃、素嚷、肝脏组织经冲洗、称重、破碎,4℃条件下.用pH5.29的11/15MNa2HPO4-KH2PO4缓冲液1:4匀浆蜗牛组织,静置,离心分取提取液,硫酸铵分级分离(0℃),SDS-PAGB,建立了这些组织蛋白分级分离SDS-PAGE电泳图谱。由此,可方便地查阅蜗牛这些组织某蛋白质(亚基)的分子量、含量、分布和存在情况。   对肝脏不同部位以不同比例Na2HPO4-KH2PO4缓冲液,提取木葡聚糖酶,硫酸铵分级分离,电透析脱盐,木葡聚糖酶活测定,发现蜗牛肝脏各部位均有木葡聚糖酶的活性,但存在部位差异性。其酶活性肝脏第3部位>第1部位>第2部位>第4部位;在0℃条件下,30%硫酸铵饱和度分级到的木葡聚糖酶的比活力最高。   肝脏木葡聚糖酶提取,硫酸铵分级分离(脱盐);Sephadex G-150凝胶层析分离:DEAE—Sephadex A-50离子交换层析纯化(比活力28.43U/mg,提纯倍数7.60.   回收率6 37%。);聚丙烯酰胺凝胶制备电泳,制备到电泳纯蜗牛肝脏木葡聚糖酶。   经部分理化性质测定,该酶相对分子量约22.7KDa,最适反应温度为45C,最适pH为5.6。   本研究设计的分离纯化技术路线和方案,能很好地满足蜗牛木葡聚糖酶的提取、分离和纯化。由电泳制备的蜗牛木葡聚糖酶,达到序列测定和制各单克隆抗体的要求。
其他文献
该文研究了SPE(Solid Polymer electrolyte)电极的制备方法及其在硫化氢间接吸收制取硫磺和氢气双反应系统工艺的电解系统中的初步应用.
学位
随着近年来能源消耗的加剧,陆地与近海油气资源已经不能满足经济可持续发展的需要,因而深水区域能源的开采是解决目前能源现状的方案之一。而钻井是深水区域能源开采的必要措施
人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)归属于逆转录病毒科中慢病毒属,主要经血液、性接触及母婴垂直途径等传播,可引起获得性免疫缺陷综合症(Acquired Immune De