中间锦鸡儿CiNAC1基因的克隆与功能分析

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:jjy2005
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植物在受到干旱、高温、盐碱、冷、虫害等胁迫以后,细胞会受到不同程度的损伤。中间锦鸡儿具有耐寒、抗旱、耐盐碱和贫瘠等特点,具有良好的防风固沙和保持水土功能。NAC转录因子家族是植物特有的、最大的转录因子家族之一,在植物应答非生物胁迫和生长发育过程中有重要的功能。本文从中间锦鸡儿中克隆得到CiNAC1基因并对其进行功能分析,具体结果如下:1.通过PCR技术,克隆得到了中间锦鸡儿CiNAC1基因1066 bp的cDNA全长序列。生物信息学分析显示,CiNAC1基因的开放阅读框ORF为921 bp,编码306个氨基酸,推导的蛋白分子量为34.57 kD,等电点为8.35,是一种亲水性蛋白,N端具有保守的NAM结构域,具有26个磷酸化位点和7个糖基化位点。2.实时荧光定量RT-PCR检测显示,中间锦鸡儿CiNAC1基因表达受干旱、高盐、脱水、高pH诱导,这表明CiNAC1基因可能与中间锦鸡儿响应逆境胁迫机制有关。3.构建了 CiNAC1-GFP融合表达载体,并转化野生型拟南芥的原生质体中,通过激光共聚焦显微镜观察其亚细胞定位,发现CiNAC1定位到细胞核中,这与它作为转录因子的功能是一致的。4.构建了 CiNAC1-HA过表达载体并转化野生型拟南芥,实时荧光定量RT-PCR检测发现获得的转基因纯合体株系中目的基因均有不同程度的表达。5.转CiNAC1基因拟南芥株系侧根数目显著多于野生型;在NaC1和甘露醇处理下,CiNAC1过表达株系种子萌发率低于野生型;乙烯处理后,过表达CiNAC1的拟南芥提前衰老。
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