【摘 要】
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本研究从福建省蔬菜作物根际土壤分离对土传病原菌具有拮抗作用的放线菌(Actinomycetes)和芽孢杆菌(Bacillus)拮抗菌株,筛选出多种土传病原菌有良好拮抗能力的放线菌菌株SC-33和芽孢杆菌YB-1,对其种类进行了鉴定,研究了放线菌菌株SC-33发酵条件及胞内抑菌活性物质的理化性质,研究主要结果如下:(1)筛选出高效广谱拮抗菌放线菌菌株SC-33和芽孢杆菌菌株YB-1,并进行种的鉴定:
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本研究从福建省蔬菜作物根际土壤分离对土传病原菌具有拮抗作用的放线菌(Actinomycetes)和芽孢杆菌(Bacillus)拮抗菌株,筛选出多种土传病原菌有良好拮抗能力的放线菌菌株SC-33和芽孢杆菌YB-1,对其种类进行了鉴定,研究了放线菌菌株SC-33发酵条件及胞内抑菌活性物质的理化性质,研究主要结果如下:(1)筛选出高效广谱拮抗菌放线菌菌株SC-33和芽孢杆菌菌株YB-1,并进行种的鉴定:通过平板对峙法初筛和发酵液滤纸片法复筛,从58个放线菌菌株、70株芽孢杆菌中分别筛选出对尖孢镰刀菌菌株(Fusarium)、胶孢炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)、致病疫霉(Phytophthora infestans)、灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、胡萝卜软腐果胶杆菌(Pectobacterium carotovorum)、茄青枯菌(Ralstonia solanacearum)等病原菌具有明显的拮抗作用的放线菌菌株SC-33和芽孢杆菌菌株YB-1。放线菌菌株SC-33和芽孢杆菌菌株YB-1发酵液对象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii)二龄幼虫(J2)也具较强的致死率。根据培养性状、形态特征、生理生化特性、并基于16SrDNA基因序列、Mrbayes法构建系统树分析,明确芽孢杆菌YB-1为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus),链霉菌株SC-33未能定至种。(2)盆栽试验表明链霉菌株SC-33和芽孢杆菌株YB-1具有抗病及促生作用:链霉菌菌株SC-33对烟草青枯病的防效为60%,对象耳豆根结线虫病的根结抑制率为40.05%。芽孢杆菌菌株YB-1对烟草青枯病的防效为40%,对象耳豆根结线虫病的根结抑制率为70.12%。促生试验表明发现芽孢杆菌YB-1和链霉菌株SC-33的100倍发酵液对空心菜种子和黄瓜种子都具有促生作用。(3)对链霉菌株SC-33液体发酵培养基及适宜培养条件进行了研究:通过发酵液对镰刀菌的抑菌效果测试选择出合适的培养基,配方为:可溶性淀粉5g,玉米粉10g,大豆粉10g,K2HPO40.5g,H2O 1000ml。优化的发酵培养条件为:初始值7.0,发酵培养温度30℃,时间 96-168h,接种量(v/v)4%,装液量 200ml/500ml。(4)对链霉菌株SC-33菌体胞内抑菌活性物质进行粗提并测定其理化性质,菌体采用不同极性溶剂提取,其中乙酸乙酯提取活性物质对多种土传病原菌抑菌活性最好。菌体胞内提取物抑菌活性物质具有在40℃以下时稳定、弱酸性条件下稳定、蛋白酶K处理保持稳定,以及紫外光照射稳定性的特点。
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