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IEX-1(X-1的即刻早期反应基因),也称为IER3,p22/PRG1,DIF-2,或鼠源性gly96,是一种应激诱导的基因。它由两个外显子一个内含子构成,基因编码产物是由156个氨基酸组成的一个18 kDa蛋白质,同时接受糖基化等多种翻译后修饰。该基因经荧光原位杂交法检测定位在染色体6p21.3,在基因组数据库中它的序列与MHC基因座毗邻,尽管与其他已知的蛋白质缺乏显著的同源性,但是,人、大鼠、小鼠的IEX-1的同源性约73％。免疫组化染色显示,IEX-1蛋白在皮肤上皮细胞,气管,肠胃,泌尿生殖系统以及胰腺和乳房大量表达,另外该蛋白在大多数组织/器官的血管内皮细胞也表达相对较高的水平。这种在组织中的分布模式表明,IEX-1在应对外部环境和与上皮组织直接接触时所起的作用。
CyclinDl蛋白是由CCND1基因编码定位于11q23的细胞周期正性调控因子。CyclinDl可以与CDK4/6形成复合物,使PRb磷酸化,释放出转录因子促使细胞周期从G1期向S期发展。CyclinDl的过度表达可以缩短细胞在G1期的时间,用微注射法将cyclinDl反义mRNA或单克隆cyclinDl抗体注入细胞后可阻止细胞进入S期,表明cyclinDl过表达可导致细胞生长失调及肿瘤的发生。
在恶性肿瘤的发生发展分子机制中,肿瘤的增殖与凋亡具有重要的作用。国内目前对于甲状腺癌中IEX-1及cyclinDl基因的表达研究报道较少。
目的:本实验拟在探讨IEX-1及cyclinDl因子在甲状腺癌、甲状腺良性结节及甲状腺正常组织中的表达,研究其在甲状腺癌发生发展中的作用,寻找新的甲状腺癌诊断方法;同时研究甲状腺癌患者IEX-1及cyclinDl基因表达与临床病理特征(性别、临床病理类型、临床分期及有无淋巴结转移)的关系,为甲状腺癌的诊断及治疗提供新的依据。
方法:
1.采用RT-PCR技术对38例甲状腺癌组织、25例甲状腺良性结节组织及25例甲状腺正常组织中IEX-1及cyclinDlmRNA的表达进行检测。
2.采用Westorn blot技术对38例甲状腺癌组织、25例甲状腺良性结节组织及25例甲状腺正常组织中IEX-1及cyclinDl蛋白的表达进行检测。
3.用SPSS17.0统计软件进行统计学分析,定量资料用均数±标准差((x)±S)表示,呈正态分布的两组间比较用t检验,非正态分布的两组间比较采用非参数分析。两组以上均数比较用方差分析(ANVOA),显著性水准α=0.05。
结果:
1.IEX-1及cyclinDlmRNA在甲状腺癌组织中的表达
1.1 IEX-1mRNA在甲状腺组织中的表达:IEX-1mRNA在甲状腺癌组织中高表达,正常组织中弱阳性表达或者阴性表达,两组间存在显著差异(F=5.381,P＜0.05);甲状腺良性结节组织的IEX-1 mRNA低于甲状腺癌组织,两组间比较存在显著差异(F=3.192,P＜0.05);正常甲状腺组织中IEX-1mRNA的表达低于甲状腺良性结节组织,两组间表达有统计学意义(F=3.829,P＜0.05)。
甲状腺癌组织中IEX-1mRNA的表达量与临床病理特征的关系:IEX-1mRNA在甲状腺癌组织中有淋巴结转移组织中的表达量大于无淋巴结转移者,两组间比较表达有显著性意义(F=3.350,P＜0.05),IEX-1 mRNA在甲状腺癌不同临床分期的Ⅲ/Ⅳ期的表达量明显大于Ⅰ/Ⅱ期,两组间比较表达有统计学意义(F=7.023,P＜0.05);IEX-1 mRNA的表达量与性别及分化类型无关(P＞0.05)。
1.2 CyclinDlmRNA在甲状腺组织中的表达:CyclinDl mRNA在甲状腺癌中高表达,正常组织中弱阳性表达或者阴性表达,两组间存在显著差异(F=3.877,P＜0.05);甲状腺良性结节组织的cyclinDl mRNA低于甲状腺癌组织,两组间比较存在显著差异(F=2.740,P＜0.05);正常甲状腺组织中cyclinDl mRNA的表达低于甲状腺良性结节组织,两组间表达有统计学意义(F=2.212,P＜0.05)甲状腺癌组织中cyclinDl mRNA的表达量与临床病理特征的关系:cyclinDlmRNA在甲状腺癌组织中有淋巴结转移组织中的表达量大于无淋巴结转移者,两组间比较表达有显著性意义(F=3.315,P＜0.05),CyclinDl mRNA在甲状腺癌不同临床分期的Ⅲ/Ⅳ期的表达量明显大于Ⅰ/Ⅱ期,两组间比较表达有统计学意义(F=6.209,P＜O.05);cyclinDl mRNA表达与性别及分化类型无关(P＞0.05)。
2.IEX-1及cyclinDl蛋白在甲状腺癌组织中的表达
2.1 IEX-1蛋白在甲状腺组织中的表达:IEX-1蛋白在甲状腺癌组织中高表达,正常组织中弱阳性表达或者阴性表达,两组间存在显著差异(F=6.675,P＜0.05);甲状腺良性结节组织的IEX-1蛋白低于甲状腺癌组织,两组间比较存在显著差异(F=6.387,P＜0.05);正常甲状腺组织中IEX-1蛋白的表达低于甲状腺良性结节组织,两组间表达有统计学意义(F=4.524,P＜0.05)甲状腺癌组织中IEX-1蛋白的表达量与临床病理特征的关系:IEX-1蛋白在甲状腺癌组织中有淋巴结转移组织中的表达量大于无淋巴结转移者,两组间比较差异有显著性意义(F=3.124,P＜0.05),IEX-1蛋白在甲状腺癌不同临床分期的Ⅲ/Ⅳ期的表达量明显大于Ⅰ/Ⅱ期,两组间比较表达有统计学意义(F=3.937,P＜0.05);IEX-1的蛋白表达量与性别及分化类型无关(P＞0.05)。
2.2 CycliriDl蛋白在甲状腺组织中的表达:CyclinDl蛋白在甲状腺癌中高表达,正常组织中弱阳性表达或者阴性表达,两组间存在显著差异(F=6.676,P＜0.05);甲状腺良性结节组织的cyclinDl蛋白低于甲状腺癌组织,两组间比较存在显著差异(F=6.297,P＜0.05);正常甲状腺组织中cyclinDl蛋白的表达低于甲状腺良性结节组织,两组间表达有统计学意义(F=4.816,P＜0.05)。
CyclinDl蛋白在甲状腺癌组织中有淋巴结转移组织中的表达量大于无淋巴结转移者,两组间比较表达有显著性意义(F=2.143,P＜0.05),CyclinDl蛋白在甲状腺癌不同临床分期的Ⅲ/Ⅳ期的表达量明显大于Ⅰ/Ⅱ期,两组间比较表达有统计学意义(F=3.318,P＜0.05);cyclinDl蛋白表达一与性别及分化类型无关(P＞0.05)。
3.IEX-1mRNA和cyclinDl mRNA相关性分析:IEX-1mRNA和cyclinDl mRNA在甲状腺癌中的表达量呈正相关(r=0.499,P＜0.05)。
结论:
1.IEX-1和CyclinDl均在甲状腺癌组织中呈高表达水平,在甲状腺良性结节中表达水平降低,在甲状腺良性组织中不表达或弱阳性表达。IEX-1和CyclinDl的表达量与甲状腺癌的Enneking外科分期及是否有淋巴结转移密切相关。IEX-1和CyclinDl表达量随着Enneking外科分期的升高呈上升趋势。提示IEX-1可以作为甲状腺癌恶性程度及预后的一项参考指标。
2.IEX-1和CyclinDl在甲状腺癌中的表达具有明显相关性,二者呈正相关,说明在甲状腺癌中二者存在相互作用,共同参与了甲状腺癌的发生发展。联合检测IEX-1和CyclinDl对于甲状腺癌的诊断、恶性程度的判断及治疗有一定的价值。