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土壤盐渍化是影响农林业生产,导致农林业生物量减少的主要非生物胁迫因子之一。盐分胁迫主要包括渗透胁迫、离子胁迫及其造成的一系列次级胁迫如氧化胁迫等,严重干扰植物体内业已存在的细胞及整株水平上的水分及离子稳态,造成植物细胞分子损伤,生长延滞甚至死亡。植物耐盐基因工程被认为是培育耐盐植物、开发利用盐碱荒地最有效、最经济的手段,但有效目的基因的缺乏,特别是来自盐生植物的耐盐基因,是限制植物耐盐基因工程发展的一大障碍。本论文的主要目的是利用真盐生植物补血草建立EST 数据库,结合盐生植物盐地碱蓬的EST 数据库,发掘来自盐生植物的耐盐基因,并且在林木模式植物杨树遗传转化方面做一些有益的尝试。1. 补血草(Limonium sinense)EST数据库的构建构建了一个补血草叶片的cDNA 文库,并从中随机挑选克隆单向测序,获得了1162 个EST序列,其中405 个EST序列与以前鉴定的基因序列具有很高的同源性。通过序列分析,鉴定了739 个独立的EST 序列,其中194 个序列与以前鉴定的基因具有同源性。所有的EST数据都将公布在GeneBank 的dbEST中。耐胁迫调控基因的EST划分为7 个主要的类别,占EST总数的3.4 %。2. 盐地碱蓬(Suaeda salsa)液泡膜焦磷酸酶基因的克隆与鉴定从400mmol/L NaCl处理的盐地碱蓬地上部分构建的λZap-cDNA文库中克隆了编码液泡膜H~+-PPase 的部分cDNA(SsVP),据已知序列设计引物利用PCR方法获得编码盐地碱蓬液泡膜H~+-PPase 的全长cDNA。对该基因的序列特征、基因组结构和在盐胁迫下的表达特性做了详细的分析。结果表明:SsVP 与已报道的红叶藜(Chenopodium rubrum)的液泡膜H~+-PPase 基因(CVP)同源性最高,Clustalx 软件对不同物种中液泡膜H~+-PPase 基因所作的系统进化分析表明SsVP与CVP 聚为一簇,均属于类型Ⅰ类液泡膜H~+-PPase;Southern杂交表明该基因在盐地碱蓬基因组中可能是多拷贝的;Northern杂交结果表明在盐胁迫和干旱胁迫下SsVP 的转录都是上行调节的,400mmol NaCl处理和干旱处理下,盐地碱蓬地上部分中SsVP 的mRNA增加。将SsVP 的全长cDNA克隆入植物表达载体pCAMBIA1300 中,导入根瘤农杆菌GV3101后,由花浸泡法进行拟南芥遗传转化,转化SsVP 的拟南芥在含潮