人类激酶基因CK1γ1L2和PDIK1L的克隆和功能研究

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蛋白激酶是催化蛋白质磷酸化的酶,它们在细胞信号传导中发挥重要作用。蛋白激酶可以分为丝/苏氨酸蛋白激酶和酪氨酸蛋白激酶。酪蛋白激酶是广泛存在于真核生物的丝/苏氨酸蛋白激酶,包括CK1和CK2两大亚类。其中CK1是发现较早的,哺乳动物的CK1发现有α、β、γ、δ和ε等5个亚家族,CK1γ亚家族目前发现有CK1γ1、CK1γ2和 CK1γ3三个成员。还有一种既能催化丝/苏氨酸残基磷酸化又能催化酪氨酸残基磷酸化的激酶,这种具有双底物特异性的激酶称为双特异性蛋白激酶。我们从胎脑cDNA文库中克隆得到两条人类的新激酶基因:CK1γ1L2和PDIK1L。CK1γ1L2为酪蛋白激酶CK1γ1的一个新的剪切体,该基因全长1756 bp,编码含438个氨基酸残基的蛋白,其核苷酸序列和氨基酸序列与大鼠CK1γ1基因相比分别为93%和94%的同源性。CK1γ1L2定位于人染色体15q22.31,包含11个外显子。亚细胞定位结果发现CK1γ1L2定位于细胞核中。Northern和Panel表达谱分析发现该基因分布于脑、肝、脾、外周血白细胞、肾、肺、小肠、卵巢、睾丸和前列腺中,在心和骨骼肌组织也可能有表达,另外CK1γ1L2在卵巢癌、结肠癌、前列腺癌、肺癌和乳腺癌中也检测到显著表达。PDIK1L基因全长4301 bp,编码含有341个氨基酸残基的蛋白。通过生物信息学分析发现它的蛋白与丝/苏氨酸激酶和酪氨酸激酶催化功能域同源性较高,有可能是个双特异性激酶。PDIK1L与人激酶CLIK1蛋白同源性为69%,CLIK1是PDZ-LIM蛋白CLP-36的相关激酶,经HUGO基因命名委员会核准,将其命名为PDIK1L,即类PDLIM1相关激酶1(PDLIM1 interacting kinase 1 like)。该基因定位于人染色体1p36.11,包含4个外显子。亚细胞定位结果发现PDIK1L也定位在细胞核中。Panel表达谱分析发现该基因广泛表达于多种组织,只是不同区域的基因序列表达存在差异,除了在胰腺、前列腺、胸腺和脾中表达之外,PDIK1L基因中段第1781~2200区域还可在外周血白细胞、结肠、小肠、卵巢和睾丸中检测到表达,而3’端附近的第3296~3724区域可在肝、肾、心、脑和胎盘中检测到表达,这有可能是因为PDIK1L基因存在不同转录本所致,或许与该基因在生物体内的功能相关。激酶的活性测定发现PDIK1L蛋白具有丝/苏氨酸激酶活性。经酵母双杂交筛选人胎脑文库并经免疫共沉淀验证,发现PDIK1L能与GRINL1A(类离子型谷氨酸NMDA受体1A)相互作用。GRINL1A是近几年发现的谷氨酸受体家族的新成员。谷氨酸受体广泛分布于中枢神经系统,对于神经信号传递起着重要作用,PDIK1L与GRINL1A的相互作用为进一步揭示PDIK1L的功能提供了一定依据。
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