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目的探究神经递质多受体抑制剂奥氮平(olanzapine),对化疗相关恶心呕吐的预防作用。探究奥氮平在肺腺癌细胞系H1299、肺鳞癌细胞系A549和正常人肺成纤维细胞系HLF中,对癌细胞的侵袭和转移的抑制作用;探究奥氮平对肺癌细胞上皮-间质转化(EMT,epithelial-to-mesenchymal transition)抑制作用的基础实验研究。方法1.搜集2016.01-2017.02大连医科大学附属第一医院化疗病人74例,回顾性分析奥氮平对化疗相关恶心呕吐(Chemotherapy-Induced Nausea and Vomiting,CINV)的预防作用。在第二代5-HT3受体抑制剂联合地塞米松止吐方案的基础上,选取第1-4周期未联合奥氮平,第2-4个周期以上联合奥氮平。参照WHO制定的抗肿瘤药物毒性反应分度标准,阿森斯失眠量表简化版,评价CINV和睡眠。同一病人化疗方案及辅助用药一致。1.1记录基本资料(姓名、住院号、性别和年龄);1.2观察记录联合奥氮平前后化疗第1-5天总恶心呕吐(恶心、干呕、呃逆和呕吐)的次数;1.3观察全身伴随状况,睡眠情况、ECOG评分和NRS评分。2.奥氮平抑制肺癌细胞的实验研究,选取肺腺癌细胞系H1299、肺鳞癌细胞系A549和正常人肺成纤维细胞系HLF。2.1细胞克隆形成实验Colony formation assay:肺腺癌细胞系H1299、肺鳞癌细胞系A549分别稀释(103个/ml),梯度浓度奥氮平25,50,100μM培养7天,计数(photoshop)细胞克隆数目,拍照(倒置显微镜)第7天细胞形态;2.2噻唑蓝染色MTT:检测(酶标仪)奥氮平对H1299、A549和HLF的半数抑制浓度IC50;2.3悬浮细胞无血清微球体培养Sphere formation assay:有限稀释H1299、A549到103个/ml,培养10天,计数和测量(倒置显微镜)H1299、A549微球体的数目和直径μm;划痕实验wound healing assay:拍照(倒置显微镜并和测量H1299、A549细胞在0小时、12小时、36小时和72小时迁移距离μm;侵袭实验transwell assay:第12小时,拍摄(正置显微镜)记录A549侵及和穿透基底膜的数目;2.4裸鼠(BALB/C Nude)肺癌转移模型的建立:随机选取6只裸鼠,再随机选取3只给予0.05mg/ml浓度的奥氮平无菌饮用水7天,第7天,6只裸鼠均于尾静脉接种肺鳞癌A549细胞,于接种后第30天,6只裸鼠均麻醉处死并解剖,观察、统计A549细胞在肺部转移灶的数目和大小(直径um);3.统计学分析均在SPSS 17.O软件包,计数资料采用卡方检验,P<O.05为统计学上具有差异性。结果1.奥氮平降低CINV发生率,改善睡眠状况,减低ECOG评分和NRS评分1.1联合奥氮平和未联合奥氮平CINV发生率,分别为86.5%和67.6%(Κ2=3.742,P=0.048),统计学上具有差异性(P<0.05);1.2睡眠障碍发生率,分别为12.3%和33.4%(Κ2=4.163,P=0.044),统计学上具有差异性(P<0.05);ECOG评分≤1的比例,分别为94.6%和83.8%(Κ2=2.242,P=0.131),统计学上无差异性(P>0.05);NRS=0的比例,分别为89.2%和78.4%(Κ2=1.591,P=0.131),统计学上无差异性(P>0.05)。2.奥氮平抑制肺腺癌细胞系H1299、肺鳞癌细胞系A549增值、侵袭和转移,抑制裸鼠移植瘤远处转移灶的大小和数目2.1奥氮平抑制H1299和A549克隆形成:25μM H1299单克隆数量由100%降低到75.19%±1.42%,A549单克隆数量由100%降低到72.27%±2.38%(P=0.012),统计学上具有差异性(P<0.05);50μM H1299单克隆数量由100%降低到61.4%±5.32%,A549单克隆数量由100%降低29.13%±3.17%(P=0.0032),统计学上具有显著差异性(P<0.01);100μM H1299单克隆数量由100%降低到15.04%±3.54%,A549单克隆数量由100%降低10.64%±2.38%(P=0.0015),统计学上具有显著差异性(P<0.01)。2.2奥氮平对H1299、A549的具有特异性;半数抑制浓度(IC50):HLF为603.34±16.1μM,H1299为142.85±8.4μM,A549为129±8.6μM(P=0.0064),统计学上有显著差异性(P<0.01)。2.3奥氮平抑制H1299和A549侵袭转移,H1299微球大小μm,由100%降低到20.04%±7.54%,A549微球大小μm,由100%降低到18.59%±4.87%(P=0.0087),统计学上有显著差异性(P<0.01);迁移距离,H1299由100%降低到40.24%±5.12%,(P=0.0087),统计学上具有显著差异性(P<0.01);A549由100%到降低到46.7%±52.2%(P=0.0096),统计学上具有显著差异性(P<0.01);侵及和穿透基底膜数目,H1299由100%降低到34.2%±5.64%(P=0.021),统计学上具有差异性(P<0.05)。A549由100%到降低到46.7%±52.2%(P=0.032),统计学上具有差异性(P<0.05)。2.4奥氮平抑制肺鳞癌A549移植瘤在裸鼠肺组织转移灶,大小μm由100%减小到56.4%±12.2%(P=0.029),统计学上有差异性(P<0.05);数量由100%减小到34.2%±13.1%(P=0.031),统计学上具有差异性(P<0.05)。结论1、奥氮平降低CINV发生率,统计学上有差异性(P<0.05);奥氮平改善患者的睡眠状况,统计学上有差异性(P<0.05);奥氮平降低病人ECOG评分和NRS评分,统计学上无差异性(P>0.05);2.奥氮平抑制肺腺癌细胞H1299和肺鳞癌细胞A549克隆增殖,统计学上具有显著差异性(P<0.01);抑制H1299和A549侵及和穿透基底膜数目,统计学上具有显著差异性(P<0.01);降低H1299和A549迁移距离,统计学上具有显著差异性(P<0.01);减少裸鼠鳞癌细胞A549移植瘤远处转移的数目和大小(直径um),统计学上均具有显著差异性(P<0.01);3.为进一步探讨奥氮平应用提供了一定的理论依据。