论文部分内容阅读
目的 (1)探讨L-选择素(CD62L)在结核杆菌抗原(Mtb-Ag)诱导人γδT细胞表达的动力学特征；(2)观察不同细胞因子对活化人γδT细胞表达L-选择素的调节作用；(3)应用信号分子阻断剂初步探讨PKC，P13K，MAPK等信号途径在人γδT细胞活化过程中对L-选择素表达的调控作用。 方法 (1)正常人外周血单个核细胞分别用Mtb-Ag和CD3单抗(CD3mAb)刺激并加IL-2培养扩增，分别获得Mtb-Ag激活的T细胞(MtbAT)(γδT细胞为主)和CD3mAb激活的T细胞(CD3AT)(αβT细胞为主)。(2)取新鲜PBMC和刺激后培养3～21天的γδT细胞和αβT细胞，用多色荧光抗体标记，在流式细胞仪上检测γδT细胞表面L-选择素的表达，并与αβT细胞作比较。(3)Mtb-Ag初次与再次刺激人γδT细胞分别培养7天，在培养同时分别按组加入IFN-γ、anti-IFN-γ、IL-12、anti-IL-12，并与培养的不同时间分别收集细胞，检测L-选择素表达情况。(4)培养6d～8d的MtbAT分别加入PMA、Ionomycin(IMN)、PMA+IMN培养3h、6h、12h、24h后，应用流式细胞术(FCM)分别检测L-选择素的表达率。(5)培养8天的γδT细胞分别加入Mtb-Ag、Rotterin+Mtb-Ag、PMA、Rotterin+PMA刺激4h，收集细胞并检测L-选择素表达。(6)MtbAT或CD3AT预先用LY294002(P13K途径抑制剂)、SB203580(p38途径抑制剂)、