反相色谱是应用最广泛的、最高效的分离技术，它具有高分离效率，极好的重现性以及与质谱兼容的特点。现在市面上有很多不同品牌的反相-液相色谱固定相，并且一直在研发新的品种。然而，现存的硅胶-基质的液相色谱固定相有一些缺点,例如，分离碱性化合物时峰拖尾，在某种程度上限制他们的应用。在过去几十年，色谱工作者们长期致力于改善硅胶基质的固定相的化学稳定性相关的研究工作。到目前为止，有很多极性-嵌入或者极性-封端新型固定相，这些固定相在反相色谱条件下对极性、强碱性以及可电离的化合物进行色谱分离时能够提供很好的分离性能。研究目的1、设计合成三个新型C₁₀二肽类极性固定相，并对其合成路线进行筛选优化。2、二肽类固定相制备成C₁₀色谱柱后，用国际公认方法对其色谱性能进行测试评价。3、考察制备的二肽类极性色谱柱实际分离分析不同类型药物色谱能力。4、对利福喷丁的人体生物等效性进行研究。实验内容及结果1、设计合成了三个新型C₁₀二肽类极性固定相：在DCC，DMAP作用下，采用直接缩合法制备中间体十一烷甘氨酰胺，再与N-氨丙基三甲氧基硅、N-氨丙基二甲基甲氧基硅、N-氨丙基二异丙基甲氧基硅反应，制得相应的硅烷中间体，产率分别为83.3%、85.1%、82.0%；然后再分别与硅胶键合、六甲基二硅氮烷封端制备得到多聚C₁₀二肽固定相、C₁₀二甲基二肽固定相和C₁₀二异丙基二肽固定相。2、对制备的三个C₁₀二肽类固定相进行了性能评价，并获得了预期效果：柱效与峰形测试、Engelhardt测试、Tanaka测试、Neue测试结果均表明我们制备的极性修饰二肽类固定相具有高选择性、高灵敏度和优秀的柱效。残余硅羟基测试中分离吡啶和苯酚时，分离因子高，吡啶的峰拖尾因更低，表明我们制备的固定相封端效果很好。pH稳定性研究结果显示，二甲基固定相在强酸、强碱条件下稳定性很好。将同一样品连续进样1000次，过程中保留时间、峰形均小于1%，说明我们制备的固定相性能稳定重现性好。流动相的pH对选择性的影响的实验表明这些二肽固定相可以在pH1.5-11范围内使用。3、对制备的三个C₁₀二肽类固定相进行了药物分析应用研究，也获得了预期效果：用制备的极性二肽类固定相考察以下八组不同类型的混合物在更宽泛的pH值和高水流动相条件下的分离效果：7类水溶性纤维素混合物；8类核苷酸混合物；α-, δ-,γ-生育酚混合物；β-受体阻断剂；4个对羟基苯甲酸酯类物质；咖啡因代谢物等。结果表明，这八类化合物均得到很好的分离结果。4、利福喷丁人体生物等效性研究：20名健康受试者两周期交叉单剂量口服受试制剂（A）600mg和参比制剂（R）600mg后，用HPLC法测定血浆中利福喷丁浓度。以参比制剂为标准对照，受试制剂的生物利用度为91.2%。两种利福喷丁制剂的药代动力学参数T_1/2、T_max、C_max、AUC_（0-72h）相近，且在人体内具有生物等效性。