荷斯坦牛精液品质相关基因分子标记研究

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根据精子发生的生殖内分泌调节机制,本研究选择参与精子发生的生殖激素基因及其受体以及与生殖有关的基因,促卵泡素受体基因(Follicle StimulatingHormone Receptor,FSHR)、抑制素α亚基基因(Inhibin-αSubunit,INHA)、抑制素βA亚基基因(Inhibin-βA Subunit,INHβA)、促性腺激素释放激素受体基因(Gonadotropin-releasing Hormone Receptor,GnRHR)、雄激素受体基因(AndrogenReceptor,AR)、芳香化酶CYP19基因(Aromatase CYP19,CYP19)和热休克蛋白70基因(Heat Shock Protein70,HSP70)作为候选基因,采用PCR-RFLP和PCR-SSCP方法,分析它们在荷斯坦种公牛共122个样本中的多态性,探讨基因型与荷斯坦种公牛精液平均采精量、精子密度、精子活力、顶体完整率和畸形率等性状的关系,结果如下:1.促卵泡素受体基因(FSHR)采用PCR-RFLP方法在群体中发现了TaqⅠ-RFLP多态性,检测到AA、AB和BB三种基因型,其中BB基因型频率最高,AB基因型次之,AA基因型最低。各基因型频率在两个来源的群体中差异不显著(P>0.05)。B等位基因频率在抽样群体中占优势地位。性状关联分析结果表明,AB型个体的原精活力(P<0.05)和顶体完整率(P<0.01)显著高于AA型个体,BB型介于二者之间。推测FSHR基因AB杂合型为优势基因型,B等位基因可能与原精活力和顶体完整率性状呈正相关。2.抑制素α亚基基因(INHA)采用PCR-RFLP方法在群体中发现了MspⅠ-RFLP多态性,检测到AA、AB和BB三种基因型,其中AA基因型频率最高,AB基因型次之,BB基因型最低。各基因型频率在两个来源的群体中差异不显著(P>0.05)。A等位基因频率在抽样群体中占优势地位。性状关联分析结果表明,AA型个体的平均采精量、原精活力和畸形率高于AB型,更高于BB型;AA型个体精子密度最高;AB型个体顶体完整率最高;但均无统计学差异(P>0.05),表明INHA基因的A-G突变位点可能与荷斯坦种公牛的精液品质无关。3.抑制素βA亚基基因(INHβA)采用PCR-RFLP方法在群体中均发现StyⅠ-RFLP多态性,检测到AA、AB和BB三种基因型,其中AB基因型频率最高,AA基因型次之,BB基因型最低。各基因型频率在两个来源的群体中差异极显著(P<0.01)。A等位基因频率在抽样群体中占优势地位。性状关联分析结果表明,对AB型个体原精活力最高,BB型个体和AA型个体相当;就顶体完整率和畸形率而言,AA基因型个体优于BB基因型个体,基因型效应表现为AA>AB>BB;对于平均采精量和精子密度BB型个体均高于AB型个体;但精液品质性状各基因型个体间差异不显著(P>0.05)。表明INHβA基因的C-T突变位点可能与荷斯坦种公牛的精液品质无关。4.用PCR-SSCP方法在群体中热休克蛋白70基因(HSP70)522bp-718bp之间未检测到突变位点。5.用PCR-RFLP方法在群体中未证实促性腺激素释放激素受体基因(GnRHR)的A-G突变、雄激素受体基因(AR)的A-G突变和芳香化酶CYP19基因(CYP19)的T-C突变。
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