目的:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistance staphylococcus aureus MRSA)是人类严重感染性疾病的常见病原菌,其对β-内酰胺类等多种抗菌药物耐药,仅万古霉素等为有效的治疗药物,导致临床治疗困难。目前在美国已分离出耐万古霉素金黄色葡萄球菌(MIC>128μg/ml),因此研究MRSA耐药机理寻找新的有效治疗药物非常重要。金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus SA)发生甲氧西林抵抗主要是与整合入染色体10分位的mecA基因有关。研究认为几种其它的与mecA不相关的基因对甲氧西林耐药的表达也是必须的,尤其是其辅助基因femA、femB对mecA表达的影响。这些基因缺失、失活、变异可降低甲氧西林抵抗的表达。目前国内尚未见辅助基因对菌株耐药性的研究和报道。本试验采用PCR扩增法从金黄色葡萄球菌中扩增femA、femB及mecA 基因,结合对常用?-内酰胺类抗菌药物的MIC值判断mecA、femA、femB基因对菌株耐药性的影响,并检测mecA基因阳性金黄色葡萄球菌对常用抗菌药物的敏感性,为进一步探讨mecA介导的金黄色葡萄球菌的耐药机制及临床选药提供依据。方法:标本来自2001年7月~2003年10月大连医科大学附属第二医院收集的81株金黄色葡萄球菌,常规分离临床标本,经凝固酶试验、API系统鉴定为金黄色葡萄球菌。按照2003年版美国临床试验室标准<WP=5>化委员会(NCCLS)推荐的琼脂二倍稀释法,从中筛选表型耐甲氧西林菌株。将受试的金黄色葡萄球菌行多重PCR扩增检测mecA、femA、femB基因。采用琼脂二倍稀释法测定所有菌株对13种抗菌药物的MIC值,统计被检菌株MIC50、MIC90及敏感率,并对mecA阳性、mecA阴性金黄色葡萄球菌对13种抗生素的药物敏感实验结果进行统计分析。结果:临床分离的81株金黄色葡萄球菌,凝固酶试验均为阳性。检出表型MRSA 46株,检出率56.8%。PCR基因检测mecA阳性株42株,检出率51.8%,mecA基因与表型MRSA的检出率无明显差异。表型MRSA中检出mecA基因阳性39株,表型与基因检测符合率84.8%。在被检菌株中检出femA阳性株75株,阴性株6株,检出femB基因阳性株74株,阴性株7株,femA、femB基因从敏感菌株、低度耐药到高度耐药菌株中均有检出。其中mecA阳性菌株中femA检出38株,femB检出37株,femA、femB基因阴性率分别为9.5%、11.9%; mecA阴性菌株中检出femA 37株,femB 37株,femA、femB基因阴性率分别为5.1%、5.1%, 对照大肠杆菌、表皮葡萄球菌未扩增出femA、femB基因条带。测定金黄色葡萄球菌对7种β-内酰胺类抗生素的MIC 值,在mecA基因阳性菌中,femA、femB阳性株对上述抗生素的MIC值明显增高,高于femA、femB阴性株。mecA基因阴性金黄色葡萄球菌,femA,femB阳性株与阴性株对各种抗生素的MIC值基本相近。在femA、femB基因阳性菌中,mecA基因阳性金葡菌对各种抗生素的MIC值明显高于mecA基因阴性金黄色葡萄球菌,具有统计学差异(P<0.05)。13种抗菌药物MIC检测结果显示,mecA阳性金黄色葡萄球菌对万古霉素最为敏感,为100%。对头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、美罗培南、阿米卡星虽有一定的敏感性,但MIC值均较低。mecA阴性菌株对各种药物除头孢唑林、头孢呋辛、头孢噻肟外,敏感性较mecA阳性菌株明显增高。结论:在我院检出的81株金黄色葡萄球菌中,表型法MRSA 56.8%,PCR基因扩增mecA阳性金黄色葡萄球菌51.8%,表型与基因检测符合率84.8%,两种方法无明显差异。81株金黄色葡萄球菌辅助<WP=6>基因femA、femB阴性株分别为6株、7株,未发现femA、femB基因变异菌株。在mecA基因阳性42株金黄色葡萄球菌中femA、femB阴性株分别为4株、5株,femA、femB阴性率较低分别为9.5%、11.9%,对照大肠杆菌、表皮葡萄球菌未扩增出femA、femB基因条带。femA、femB基因从敏感菌株、低度耐药到高度耐药菌株中均有检出。mecA阳性金黄色葡萄球菌对7种β-内酰胺类抗生素的MIC值在femA、femB基因阳性菌中明显高于femA,femB基因阴性菌,femA、femB基因对mecA耐药表达可能有协同作用。在femA、femB基因阳性菌中,mecA基因阳性金葡菌对各种抗生素的MIC值明显高于mecA基因阴性金黄色葡萄球菌,未发现万古霉素耐药株。mecA阳性金黄色葡萄球菌对万古霉素最为敏感,对头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、美罗培南、阿米卡星体外虽有一定的敏感性,但均较低。mecA阴性金黄色葡萄球菌对各种药物的敏感性明显增高。