【摘 要】
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目的构建舌鳞癌Tca8113细胞系中高、低醛脱氢酶活性(high/lowaldehyde dehydrogenase activity， ALDHlowhigh/ALDHlowlow)细胞差异基因cDNA文库。方法用流式细胞仪检测ALDEFLU
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目的构建舌鳞癌Tca8113细胞系中高、低醛脱氢酶活性(high/lowaldehyde dehydrogenase activity， ALDHlowhigh/ALDHlowlow)细胞差异基因cDNA文库。方法用流式细胞仪检测ALDEFLUOR染色的Tca8113细胞中干细胞标志物ALDHlow的表达，并收集ALDHlowhigh和ALDHlowlow细胞；用Trizol分别提取两亚群细胞的总RNA；用抑制性消减杂交（SSH）对两组RNA进行差异基因筛选和扩增，扩增产物与pMD18-T载体连接并转化大肠杆菌DH5a。文库扩增后，每库随机挑取24克隆进行酶切、测序及同源性分析。果分选得到ALDHlowhigh和ALDHlowlow两亚群细胞，其中ALDHlowhigh细胞的比例为2.5%；分光光度计测得ALDHlowhigh和ALDHlowlow的RNA OD260/OD280的比值分别为1.93和1.92；构建了ALDHlowhigh和ALDHlowlow细胞差异基因cDNA双向文库，每个库约500个克隆菌落，每库随机挑选24个菌落进行PCR分析，克隆片段均匀分布在200bp～700bp，无假阳性克隆。测序结果经同源性比对分析和PubMed检索，其中与肿瘤有关的基因有，SLC25A13、KLHL2、NPC1、WAPL、BARD1、Notch2、EEF2K。论成功构建的ALDHlowhigh和ALDHlowlow细胞差异基因cDNA文库，为下一步找出两亚群细胞的差异基因和为最终找到舌鳞癌干细胞特异性标志物提供帮助。
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