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目的1.对HIV阴性梅毒病例进行回顾,分析神经梅毒发生相关的危险因素,并评估以血清学试验作为进行腰椎穿刺术指征的可行性。2.构建以梅毒螺旋体重组蛋白Tp0435和Tp0574为特异性抗体的荧光素酶免疫吸附系统,并评价该方法在神经梅毒诊断中的意义,为探索神经梅毒诊断新方法提供一定的实验依据。方法1.回顾性分析145例住院接受脑脊液检查的HIV阴性梅毒患者的临床资料和实验室检查结果,根据患者的临床表现和脑脊液检查结果确诊53例为神经梅毒患者,92例为非神经梅毒患者。通过比较两组患者一般资料、临床特征、TP血清学试验、血液生化检查等资料,分析神经梅毒的相关危险因素。评估血清TRUST对神经梅毒的预测价值。2.从GenBank获取Tp0435和Tp0574基因序列,以TpNichols标准株基因组DNA为模板,PCR扩增其全基因片段;构建pNLF1-N-Tp0435和pNLF1-N-Tp0574真核表达体系,经酶切、测序鉴定正确后转染至He La细胞,提取细胞裂解液。以protein G包被96孔板,经孵育后依次加入待测样本、细胞裂解液及荧光素酶底物,建立Tp0435-LISA和Tp0574-LISA方法,通过检测荧光值确定特异性抗体水平。分别对神经梅毒患者和梅毒患者血清、脑脊液进行检测,初步评价Tp0435-LISA和Tp0574-LISA在神经梅毒诊断中的应用价值。结果1.单因素分析结果显示性别、年龄、血清TRUST滴度、神经系统症状、CSF氯化物、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶、碱性磷酸酶、总胆红素、尿素氮、肌酐、尿酸与神经梅毒的发生相关。多因素Logistic回归分析结果显示性别和血清TRUST是神经梅毒发生的相关危险因素。血清TRUST滴度升高,非神经梅毒患者随之减少。通过绘制ROC曲线分析显示,血清TRUST的最佳临界值为1:8,能筛查出77.4%的确诊神经梅毒病例。2.通过PCR扩增分别获得483bp和1318bp大小目的片段;pNLF1-N-Tp0435和pNLF1-N-Tp0574真核表达体系经双酶切和测序鉴定后证实插入的基因为Tp0435和Tp0574。3.建立的Tp0435-LISA方法检测20例神经梅毒和43例梅毒血清和脑脊液,敏感性分别为80%和100%,特异性分别为81.4%和97.7%;建立的Tp0574-LISA方法检测20例神经梅毒和43例梅毒血清和脑脊液,敏感性分别为90%和100%,特异性分别为55.8%和69.8%。4.对63例梅毒脑脊液样本进行Tp特异性抗体检测,CSF-Tp0435-LISA敏感性为100%、特异性为97.7%、阴性似然比为0、阳性似然比为43.48%;CSF-Tp0574-LISA敏感性为100%、特异性为69.8%、阴性似然比为0、阳性似然比为3.31;CSF-TPPA敏感性为95%、特异性为58.1%、阴性似然比为8.61、阳性似然比为2.27;CSF-FTA-ABS敏感性为100%、特异性为65.1%、阴性似然比为0、阳性似然比为2.87。5.一致性检验结果显示:CSF-VDRL和CSF-Tp0435-LISA的Kappa值=0.964,提示二者具有极高一致性;CSF-VDRL和CSF-Tp0574-LISA的Kappa值=0.621,提示二者具有较高一致性。结论1.性别和血清TRUST滴度可作为预测神经梅毒发生的辅助指标,血清TRUST对神经梅毒具有一定的筛查能力,滴度≥1:8的患者发生神经梅毒的可能性增加,可将此临界值作为对HIV阴性梅毒患者进行脑脊液检查的血清学指征,减少对血清TRUST<1:8的梅毒患者行腰椎穿刺术。2.成功构建真核表达体系pNLF1-N-Tp0435和pNLF1-N-Tp0574,建立的Tp0435-LISA和Tp0574-LISA对神经梅毒诊断具有高敏感性和较好的特异性。血清Tp0435-LISA和Tp0574-LISA检测特异性抗体水平对预测神经梅毒具有重要意义。3.CSF-Tp0435-LISA的各项诊断能力评价指标均优于其他TP特异性抗体试验,是一种颇具潜力的新型诊断技术,CSF-Tp0574-LISA、CSF-TPPA、CSF-FTA-ABS三种Tp特异性抗体试验具有高敏感性、高阴性预测值,可用于神经梅毒的排除诊断。