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为了解北方某地区牛群中布鲁菌病的疫情,采取更为有效的防控措施,本文利用虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)和间接酶联免疫吸附试验(I-ELISA)随机对该地区牧场及散养牛群进行了布鲁菌病流行病学调查,同时对以上三种方法的检测水平进行了比较;根据GenBank已发表的布鲁菌基因序列计合成三对特异性引物,建立了同时检测布鲁菌属及牛、羊种布鲁菌的诊断鉴别性多重PCR方法,并对其进行了初步应用。用上述三种方法随机对北方某地区牧场和散养牛的950份血清进行布鲁菌病血清抗体检测,表明该地区布鲁菌病流行情况较为严重,但不同群体阳性率差异较大,牧场阳性率最高达50%,最低阳性率仅为4.6%,种牛场未检出阳性血清,散养奶牛阳性率为39.3%;RBT检出阳性血清105份,阳性率为15.8%,SAT检出阳性血清128份,阳性率为19.2%,I-ELISA检出阳性血清262份,阳性率为27.6%,结果表明I-ELISA阳性率最高,SAT次之,RBT最低。所建立多重PCR方法的敏感性可达100pg左右,且具有很好的特异性与重复性,对7株参考株葡萄球菌26001等的PCR扩增均为阴性,初步临床样品应用表明该方法可用于乳样、阴道及粪便棉拭的检测。