论文部分内容阅读
背景：脾气虚证（syndrome of deficiency of spleen-qi，SDSQ）主要症状有纳少，腹胀，便溏等，表现为胃肠运动功能障碍。改善胃肠动力有效地恢复消化道吸收、内分泌和免疫等功能，可有效防治脾气虚证。Cajal间质细胞（interstitial cellsof Cajal，ICC）参与胃肠运动调控，彼此连接形成网络状结构，广泛分布在胃肠道肌层，是介于肠神经系统（enteric nervous system，ENS）与平滑肌细胞（smoothmuscle cell，SMC）之间的一类特殊细胞。肠神经释放递质作用于ICC，经过ICC的信息加工，传递给平滑肌，引起胃肠运动。ENS、ICC和SMC三者相互联系，参与胃肠运动的调节。同时，临床和动物实验研究都表明针刺足三里和天枢穴可纠正胃肠运动功能紊乱，从而有效治疗脾气虚证。目的：以脾气虚大鼠模型为实验对象，应用共聚焦显微镜和透射电镜，观察脾气虚大鼠小肠ENS、ICC和SMC的形态学变化以及针刺足三里穴和天枢穴修复作用的影响，探讨脾气虚证致胃肠运动障碍的产生机制及针刺足三里穴和天枢穴治疗脾气虚证的机理。方法：选取清洁级成年Wistar大鼠60只，体重180g-220g，雌雄各半，随机分组：①正常对照组（10只）；②脾气虚证组（10只）；③自然恢复组（10只）；④针刺足三里穴治疗组（10只）；⑤针刺天枢穴治疗组（10只）；⑥针刺足三里+天枢穴治疗组（10只）。正常对照组每只大鼠按照脾气虚证组灌服等量生理盐水，饮食不限。脾气虚证大鼠动物模型建立依据陈小野的方法。针刺“足三里”和“天枢”。取各组大鼠上段小肠组织用于激光扫描共聚焦显微镜检测。制作标本用于透射电镜观测。结果：1胃肠大体形态观察：正常对照组：胃肠蠕动良好，肠管色泽红润，无扩张、水肿，形态完好。脾气虚证组：肠管呈暗红色，浆膜充血、水肿，胃肠蠕动波少见，针刺足三里穴治疗组、针刺天枢穴治疗组以及针刺足三里+天枢穴治疗组针灸治疗后，肠管呈红色，肠蠕动基本正常，粘膜水肿基本减退。2免疫荧光共聚焦显微镜检测（1）肠神经：正常对照组大鼠小肠PGP9.5、ACh、SP、VIP和NO神经纤维相互间的连接正常，形成完整的网络状结构。脾气虚证组大鼠与正常对照组相比，PGP9.5、ACh、SP、VIP和NO神经纤维数量均明显减少（P＜0.05），荧光IOD值明显下降（P＜0.05）。自然恢复组大鼠较之正常对照组，小肠PGP9.5、ACh、SP、VIP和NO神经纤维数量减少（P＜0.05），荧光IOD值下降（P＜0.05），与脾气虚证组无差异。针刺足三里穴治疗组、针刺天枢穴治疗组以及针刺足三里+天枢穴治疗组较之脾气虚证组和自然恢复组，小肠PGP9.5、ACh、SP、VIP和NO神经纤维数量明显增多（P＜0.05），细胞荧光IOD值明显上升（P＜0.05），与正常对照组无明显差异，各针灸组之间无明显差异。（2）ICC网络：正常对照组大鼠小肠ICC相互间连接完好，ICC网络结构正常。造模成功后，脾气虚证组与正常对照组相比，ICC数量明显减少，荧光IOD值均明显下降（P<0.05），ICC网络明显受到破坏。自然恢复组较之正常对照组，小肠ICC数量减少，荧光IOD值均明显下降（P<0.05），ICC网络受损，较之脾气虚证组无明显差别。针刺足三里穴治疗组、针刺天枢穴治疗组以及针刺足三里+天枢穴治疗组较之于脾气虚证组和自然恢复组，ICC数量明显增加，荧光IOD值均明显上升（P<0.05），ICC网络基本保持完整，与正常对照组无明显差异，各针灸组之间无明显差异。（3）SMC：正常对照组SMC结构正常。造模成功后，脾气虚证组与正常对照组相比，SMC荧光IOD值均明显下降（P<0.05），SMC结构明显受到破坏。自然恢复组较之正常对照组，小肠SMC荧光IOD值均明显下降（P<0.05），SMC结构受损，较之脾气虚证组无明显差别。针刺足三里穴治疗组、针刺天枢穴治疗组以及针刺足三里+天枢穴治疗组较之于脾气虚证组和自然恢复组，SMC荧光IOD值均明显上升（P<0.05），SMC结构基本保持正常，与正常对照组无明显差异，各针灸组之间无差别。3透射电镜观测ICC超微结构：正常对照组ICC体积小，多呈星形或梭形，细胞核较大，细胞质少，含有丰富的细胞器。脾气虚证组ICC减少，胞浆内细胞器数量明显减少，细胞质电子密度不均，细胞核皱缩。细胞结构明显受损。自然恢复组ICC胞浆内细胞器数量较正常对照组减少，细胞核电子密度不匀，形态结构紊乱。针刺足三里穴治疗组、针刺天枢穴治疗组以及针刺足三里+天枢穴治疗组ICC胞浆内细胞器数量较多，形态结构较为清楚，细胞核基本正常。结论：（1）脾气虚时，大鼠小肠充血水肿，小肠动力功能障碍；针刺足三里穴及天枢穴治疗能够显著减轻小肠充血水肿，改善小肠功能。（2）脾气虚时，小肠PGP9.5、ACh、SP、VIP和NO神经纤维数量明显减少，肠神经网络结构破坏严重；针刺足三里穴及天枢穴能够减轻肠神经的损坏，维持肠神经网络结构的完整。（3）脾气虚时，ICC数量减少，完整的网络状结构明显损坏；针刺足三里穴及天枢穴可减轻ICC形态结构损伤，基本保持ICC网络结构的完整。（4）脾气虚时，SMC结构明显损坏；针刺足三里穴及天枢穴可减轻SMC形态破坏，保持SMC结构基本完整。（5）脾气虚时，ICC超微结构受损；针刺足三里穴及天枢穴能够减轻ICC超微结构的破坏，维持ICC形态的基本完整。