西葫芦离体雌核培养诱导胚囊再生植株技术研究

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西葫芦离体雌核培养技术研究是创制育种新资源的一条重要途径。本试验选用6个西葫芦杂种一代品种为试材,开展未授粉子房和未受精胚珠培养研究,探讨了培养基中激素种类及浓度、栽培季节、“座果王”处理时期和时间、雌花节位和胚珠切割方式等因素对胚状体诱导的影响;根据西葫芦雌花发育程度和子房纵径长度,制作石蜡切片观察了西葫芦子房胚珠和胚囊的发育过程;为了提高胚囊再生植株的成活率对其进行了驯化移栽试验。研究的主要结果如下:1. MS培养基中添加TDZ比添加6-BA与NAA组合诱导西葫芦未授粉子房出胚效果好;适宜诱导胚状体的培养基为:MS+30g·L-1Suc+8g·L-1Agar+0.06mg·L-1TDZ。秋季栽培的西葫芦未授粉子房胚状体诱导率最高,夏季高山栽培次之,春季栽培最低。2.西葫芦子房开花当天和开花前一天用“座果王”处理的未受精胚珠胚状体诱导率显著高于开花后一天处理,诱导率最高的为开花当天处理。“座果王”处理14d诱导胚状体效果最好。西葫芦中节位雌花未受精胚珠胚状体诱导率显著高于低节位和高节位雌花,最高可达8.13%,高节位的雌花不易诱导出胚状体。西葫芦未受精胚珠4种切割方式的诱导率呈现横切>纵切>切喙>完整胚珠的趋势,横切胚珠培养的胚状体诱导率高达9.65%。3.通过观察西葫芦子房石蜡切片可以得出,开花当天的胚囊大多数处于八核期;开花当天的西葫芦子房最适宜诱导出胚状体。4.西葫芦胚状体适宜诱根培养基为MS+30g·L-1Suc+8g·L-1Agar+0.5mg·L-1GA3,添加GA3比NAA在生根率、生根时间和生根质量等方面都具有优势。西葫芦胚囊再生植株5~6片真叶期是最佳驯化移栽时期,再生植株移栽成活率高达90.0%。5.根尖细胞染色体计数鉴定西葫芦胚囊植株倍性,40株胚囊植株中5株为单倍体,单倍体植株率为12.5%。
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