【摘 要】
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用固体平皿抗性实验、液体培养降解2-氯酚的方法,从21株白腐菌中初筛、复筛后一株可在较宽温度范围内降解2-氯酚的菌株W-28(Coriolus versicolor).该菌株在降解2-氯酚的液体
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用固体平皿抗性实验、液体培养降解2-氯酚的方法,从21株白腐菌中初筛、复筛后一株可在较宽温度范围内降解2-氯酚的菌株W-28(Coriolus versicolor).该菌株在降解2-氯酚的液体培养基中只检测出漆酶酶活,并通过其粗酶液降解2-氯酚的实验,可以得知2-氯酚的降解与漆酶酶活之间有很好的线形关系.漆酶是白腐菌W-28产生的唯一木素降解酶类,且该菌产漆酶能力强,有开发利用价值.我们通过实验确定了该菌在液体培养条件下产漆酶的培养基组分和培养条件,从而使单位培养液中酶活力有所提高.确定了葡萄糖和蛋白胨分别为W-28产漆酶的最适的碳源和氮源,并发现Cu<2+>浓度对漆酶生产有很大的影响.两水平部分因子实验设计结果表明,在18g/L葡萄糖、7g/L蛋白胨、0.05g/L Cu<2+>条件下,漆酶活力可达到6.58U/ml.对W-28产生的漆酶粗酶液通过超滤浓缩、分子筛和离子交换层析进行了纯化.Native-PAGE结果显示粗酶液中存在两种漆酶组分.对其中量占优势的lacA进行了纯化.用SDS-PAGE确定了漆酶lacA的分子量大约为66.0kDa.等电聚焦电泳显示该酶的等电点等于或小于3.5.80℃时酶瞬时反应速率最高,60℃的半衰期为25min,最适pH值为4.0.该酶氧化2,6-二甲氧基苯酚(DMP)的Km为94.5μmol/L.lacA中含2-4个铜离子,糖含量约为35.9﹪.金属离子对酶活有一定的影响,大多数金属离子对酶活力有明显的抑制作用,如Fe<2+>、Fe<3+>、Hg<2+>、Co<2+>、Ba<2+>、Ca<2+>等,而金属离子K<+>、Mn<2+>对酶活力有少许的促进作用.
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