酵母2-苯乙醇耐受性的研究和高产菌株的选育

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2-苯乙醇(又称β-苯乙醇)是一种具有玫瑰花香的芳香醇,广泛应用于医药、食品、化妆品、烟草和日化用品等产业中,随着天然2-苯乙醇市场需求量的不断增加,利用酵母生物转化生产天然2-苯乙醇具有广阔的市场前景和应用价值。但2-苯乙醇对酵母的抑制作用是生物法合成2-苯乙醇的瓶颈之一,研究酵母对2-苯乙醇耐受性有可能使2-苯乙醇产量大幅提高。本课题通过对实验室保藏13株工业酵母菌株耐受性和转化生产2-苯乙醇的能力进行测定,筛选到一株2-苯乙醇高耐受性高产菌Saccharomyces cerevisiae CWY132并确定了检查和评价其2-苯乙醇耐受性的培养条件。用紫外诱变方法对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae CWY132进行诱变育种,获得了10株2-苯乙醇耐受性菌株。对耐受性突变酵母菌株的2-苯乙醇耐受性与产量之间的关系进行了考察,其中CWY132-10菌株的耐受性和产量都较高,耐受性较原始菌株提高了50%,产量提高了9.1%。又通过紫外诱变、60Coγ射线、N+注入等诱变方法对CWY132-10菌株做了第二轮的诱变育种,筛选到一株CWY132-10-γ2,其2-苯乙醇耐受性达到3.5 g/L,比原始出发菌株提高了75%,产量提高了15.1%,L-苯丙氨酸摩尔转化率达到97%。对筛选到的高耐受性菌株CWY132-10-γ2的发酵培养基和培养条件运用均匀设计进行优化,使得2-苯乙醇产量达到3.9 g/L,较原始出发菌株CWY132提高了18%。在筛选2-苯乙醇高耐受性突变株的同时,考察了二倍体菌株Saccharomyces cerevisiae CWY132的ARO9基因在合成2-苯乙醇中的作用,结果发现其中的一个ARO9基因敲除后2-苯乙醇产量下降了12%。但仍有必要再敲除该二倍体菌株中的另外一个ARO9等位基因,详细研究ARO9基因在转化合成2-苯乙醇的重要作用。
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