抗人T淋巴细胞CD4人-鼠嵌合抗体真核表达的研究

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CD4属于Ig超家族,为细胞膜表面单链糖蛋白,是HIV的主要受体。CD4+T细胞参与大多数自身免疫性疾病的发生,而抗CD4的抗体可清除或抑制CD4+T细胞,从而调节异常的T细胞应答。国外已对鼠源性抗CD4单抗用于治疗类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮等自身免疫性疾病进行了广泛而深入的研究,临床疗效良好。但是,鼠源性单抗应用于人体治疗将引起人抗鼠抗体(HAMA)反应,反复使用可导致人体产生过敏反应且降低治疗效果,将鼠单抗改造为人-鼠嵌合抗体能降低HAMA反应。嵌合抗体临床试用的大量研究表明,它临床疗效好,免疫原性与其它人源化抗体相似,而亲和力常常高于其它人源化抗体。 本研究首先对质粒PAG4622+CD4VL和PAH4604+CD4VH进行双酶切及DNA测序鉴定,证实其为含有鼠源性可变区和人源恒定区的嵌合抗体轻、重链表达载体。然后,绘制SP2/0细胞生长曲线确定SP2/0细胞最适生长条件,并通过抗生素筛选SP2/0细胞浓度的摸索,确定了组胺醇、霉酚酸联合筛选对SP2/0细胞的最低致死量为3.5mmol/L+1.1ug/ml。接着,采用电穿孔转染质粒DNA的方法,将制备好的线性质粒PAH4604+CD4VH和PAG4622+CD4VL共转染SP2/0细胞,通过组胺醇、霉酚酸联合筛选4~6周,获得了0925CASP2/0和1107CASP2/0两株阳性SP2/0细胞株。最后,通过ELISA、流式细胞术、RT-PCR和DNA测序的方法对0925CASP2/0和1107CASP2/0细胞进行了初步鉴定。结果表明,本研究成功地在真核细胞SP2/0中表达了抗人CD4人-鼠嵌合抗体,表达产量为1~2ng/ml。
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