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目的1.观察幽门螺旋杆菌感染对人胃黏膜上皮细胞内β-Catenin的表达及磷酸化的影响。2.明确CagA蛋白对人胃黏膜上皮细胞β-Catenin的表达及磷酸化的影响。3.探讨CagA蛋白诱导胃黏膜上皮细胞内β-Catenin表达增加的分子机制。方法1.收集胃窦黏膜活检标本80例,切片观察胃黏膜的病理变化;2.免疫组化染色观察胃黏膜组织中的HP感染状况:所有胃黏膜标本切取6um厚的组织切片,标本经脱蜡、水化后,采用HP特异抗体检测胃黏膜组织中HP的感染状况,根据有无HP感染,所有标本分为HP阳性组及HP阴性组。3.PCR扩增观察HP阳性胃黏膜组织中HP的CagA基因状态所有HP阳性的胃黏膜标本分别切取6-8张6um厚的组织切片,放入消毒的EP管中,采用Qiagen公司的试剂盒,从石蜡包埋组织中提取DNA,并以此DNA作为模板,采用CagA特异的引物扩增CagA基因,扩增产物采用琼脂糖凝胶电泳分析。HP阳性胃黏膜又被进一步分为CagA阳性组与CagA阴性组。4.免疫组化染色观察胃黏膜上皮细胞中β-Catenin及p-β-Catenin的表达及分布,采用半定量及定量方法,分析不同CagA状态的HP感染对胃黏膜上皮细胞内β-Catenin的表达、分布及磷酸化的影响。5.采用细胞培养及基因转染实验探讨CagA蛋白诱导胃黏膜上皮细胞内β-Catenin的表达增高的分子机制。结果1.HP感染诱导人胃黏膜上皮细胞内β-Catenin的表达增高。2.HP感染诱导的胃黏膜上皮细胞内β-Catenin的表达增高与CagA基因的状态有关,CagA阳性的HP感染使胃黏膜上皮内β-Catenin的磷酸化减少。3.CagA蛋白可能通过抑制PAR1b/MARK2激酶活性,导致β-Catenin的磷酸化降低。结论1.幽门螺旋杆菌感染可诱导人胃黏膜上皮细胞内β-Catenin的表达增加。2.HP诱导的胃黏膜上皮细胞内β-Catenin的表达增高与CagA蛋白的状态密切相关,CagA蛋白抑制胃黏膜上皮细胞内β-Catenin的磷酸化。3.CagA蛋白可能是通过抑制PAR1/MARK2激酶的活性,导致胃黏膜上皮细胞内β-Catenin磷酸化水平降低。