【摘 要】
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目的:研究Hedgehog（Hh）信号通路拮抗剂GANT61在体内外对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响,并在体内观察GANT61对裸鼠移植瘤增殖的影响,以期为宫颈癌的分子靶向治疗提供实验依据。方法:第一部分GANT61对宫颈癌Hela细胞及裸鼠移植瘤凋亡的影响1.以He La细胞为材料,实验组加入GANT61,对照组加入DMSO。2.Western-blot和RT-PCR检测Hela细胞中Gli1蛋白
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目的:研究Hedgehog（Hh）信号通路拮抗剂GANT61在体内外对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响,并在体内观察GANT61对裸鼠移植瘤增殖的影响,以期为宫颈癌的分子靶向治疗提供实验依据。方法:第一部分GANT61对宫颈癌Hela细胞及裸鼠移植瘤凋亡的影响1.以He La细胞为材料,实验组加入GANT61,对照组加入DMSO。2.Western-blot和RT-PCR检测Hela细胞中Gli1蛋白和m RNA的表达。3.TUNEL法检测两组He La细胞凋亡率。4.分别将两组细胞接种于裸鼠皮下,观察两组裸鼠皮下移植瘤生长的情况。5.HE染色观察两组裸鼠移植瘤形态。6.免疫组化检测两组移植瘤中Caspase-3和Survivin的表达。第二部分GANT61对宫颈癌Hela细胞裸鼠移植瘤增殖的影响1.裸鼠皮下注射Hela细胞,成瘤后分组,实验组注射GANT61,对照组注射溶剂,观察两组裸鼠皮下移植瘤生长的情况。2.剥除肿瘤后称重,比较两组移植瘤的重量。3.HE染色观察两组裸鼠内脏组织形态,Western-blot和RT-PCR检测两组移植瘤中Gli1的表达。4.免疫组化检测两组移植瘤组织中Fox M1、Cyclin D1和Ki-67的表达。HE染色观察两组裸鼠心肝脾肺肾病理学形态。结果:第一部分GANT61对宫颈癌Hela细胞及裸鼠移植瘤凋亡的影响（1）体外实验:实验组He La细胞中Gli1m RNA和蛋白的表达水平分别为0.81±0.47和0.15±0.07,低于对照组的2.37±1.61和0.44±0.07,（P<0.05）。实验组He La细胞的凋亡率为（27.1±11.4）%,高于对照组（6.9±3.1）%（P<0.05）。（2）体内实验:接种28天后,实验组裸鼠移植瘤体积为（217±78）mm~3,对照组裸鼠移植瘤体积为（677±177）mm~3（P<0.05）;光镜下,实验组裸鼠移植瘤组织中细胞凋亡较对照组明显,实验组Caspase-3、Survivin蛋白IOD值分别为29335.26±1512.23和12382.23±1078.56,对照组11530.32±1012.13和31032.39±1292.43两组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。第二部分GANT61对宫颈癌Hela细胞裸鼠移植瘤增殖的影响药物治疗28天后,实验组裸鼠移植瘤体积及移植瘤重量分别为（222±9）mm~3和（0.33±0.07）g,低于对照组的（1223±284）mm~3和（2.06±0.32）g,差异有统计学意义（P<0.05）。3.实验组Gli1蛋白和m RNA表达水平为0.087±0.052和0.52±0.074,低于对照组的0.34±0.12和1.091±0.13,差异有统计学意义（P<0.05）。4.实验组移植瘤组织中Fox M1、Cyclin D1和Ki-67的IOD值分别为18600±900、13100±1100和16200±300,对照组的IOD值分别为25300±500、28800±700和34700±190,差异有统计学意义（P<0.05）。5.光镜下,两组裸鼠心肝脾肺肾形态学无明显差异,无明显毒副作用。结论:1.GANT61可在体内外抑制He La细胞中Gli1表达。2.GANT61可以抑制宫颈癌裸鼠移植瘤增殖,促进凋亡。3.GANT61促进凋亡机制可能与上调Caspase-3和下调Survivin有关,抑制增殖机制可能与下调Fox M1、Cyclin D1以及Ki-67有关。该研究可望为宫颈癌的分子靶向治疗提供理论和实验依据。
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