精神心理因素与颞下颌关节紊乱病的关联研究

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目的:第一,通过对乌鲁木齐青少年TMD流行病学的调查,综合分析TMD症状和体征的发生率,以及与精神心理问题之间可能的关联。第二,通过建立大鼠心理应激动物模型,观察颞下颌关节组织结构变化,并经免疫组化分析一些细胞因子在关节组织内的表达情况;研究心理应激状态下大鼠咬肌组织功能活动性变化,以及COMT基因在咬肌组织的表达,初步探讨心理应激对颞下颌关节紊乱病的影响及可能的机制。方法:第一部分:采用随机整群抽样调查乌鲁木齐市水磨沟区3所学校的30个班的7-9年级学生1408名,12~15岁,进行精神状态的相关问卷调查和颞下颌关节系统的症状和体征检查,计算TMD症状与体征发生率及与精神心理状态之间的关联程度。第二部分:①wister雄性大鼠48只,随机分成4组,每组12只。心理应激组分为3周组、6周组、和恢复6周组,另一组为不加刺激的空白对照。在同等喂养环境和条件下,应激组给予电击足部、气候箱温度刺激、食物诱惑、和铁筒制动四种方式交替进行刺激,期间测量各组大鼠平均每日进食进水量和体重变化及场旷实验得分,并于刺激3周、6周和恢复6周的时间点分别处死,解剖取完整咬肌和颞下颌关节组织备用。咬肌组织左右侧分别随机放入到-20℃和-80℃冰箱中保存备用。②对取得的颞下颌关节组织进行固定、切片,光镜下观察关节盘、关节软骨、关节骨质和滑膜四种组织结构。③切片行免疫组化分析大鼠颞下颌关节髁突软骨细胞MMP-3、TIMP-3、VEGF、TGF-β1的表达变化。第三部分:①利用低温离心机和全自动生化仪测试各组咬肌组织的肌酸肌酶(CK)、C反应蛋白(CRP)、和乳酸脱氢酶(LDH)含量,并进行比较。②对-80℃冰箱保存之咬肌做儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)荧光定量PCR及凝胶电泳。结果:第一部分:1408名初中生中,有一种以上的TMD体征者156名(11.8%),有1种以上TMD症状者有298名(21.16%)。TMD的3个主要症状和体征(张口困难、弹响与杂音、肌肉及关节区疼痛)以及口腔异常功能(紧咬牙和夜磨牙)都与精神心理状态密切相关,P<0.001。第二部分:①平均体重、平均摄食摄水量和场旷实验的行为学改变分析各组大鼠应激状态,应激的三个组与对照组比较有明显差异,应激组之间比较6周组比3周组和恢得组的评分都明显高,差异均有统计学意义。②实验3周组和6周组大鼠髁突表面胶原纤维排列紊乱,局部粗糙,增殖带和透明软骨带细胞层数减少,软骨细胞层数减少到3-5层以下,髁突软骨出现裂隙,骨小梁排列紊乱,关节盘变薄等,且6周组比3周组变化明显,差异均有统计学意义。恢复组与3周组表现相似,滑膜水肿等表现有缓解。③免疫组化结果显示各细胞因子在关节组织中均可见表达。MMP-3表达阳性率,实验6周组明显大于对照组,P<0.01;实验3周组明显大于对照组,P<0.05,其余各组间比较无差异;恢复组TIMP-3表达阳性率明显大于对照组,P<0.05;恢复组VEGF表达阳性率明显大于实验3周组和对照组,P<0.05;TGF-β1表达阳性率实验6周组明显大于对照组,P<0.05;第三部分:①CK和LDH测定,实验3周组、6周组、恢复组均明显高于对照组,恢复组明显高于实验3周组和6周组,差异有统计学意义(P<0.05)。CRP测试恢复组明显高于实验3周组、实验6周组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05)其它各组间无明显差异(P>0.05)。②OMT基因荧光定量PCR四组数据总体比较有统计学意义,Hc=8.355,P=0.039,大鼠咬肌组织中COMT表达水平由低到高依次为实验6周组、3周组、恢复组和对照组,但均无统计学意义。结论:①儿童青少年的TMD患病率比较高,而且其症状体征与一些精神心理因素有关联,需引起重视。②长期的足底电击、制动、气候箱和食物诱惑刺激可以明显改变大鼠的行为,精神状态极为紧张恐惧,体重、摄食摄水量和场旷试验综合评价证明动物处于心理应激状态或大鼠心理应激模型构建成功。心理应激下大鼠颞下颌关节组织结构出现了病理变化,主要为髁状突软骨结构紊乱,层数变少,并有断裂,病变程度与刺激时间成正比,刺激去除后关节组织病变可轻度恢复并伴有部分修复现象。大鼠颞下颌关节组织结构病变程度重者髁突软骨细胞MMP-3表达阳性率高,MMP-3高表达与颞下颌关节组织结构破坏有关,恢复组TIMP-3高表达说明其在软骨组织修复中起了重要作用;恢复组VEGF在关节软骨表达明显增高说明了刺激去除之后组织有血管生成修复现象。TGF的表达与组织破坏程度成正比,可能在心理应激状态之下发生较多骨吸收的作用,相对成骨的作用较少,而且各因子之间可能有着相互调节的作用。③大鼠在心理应激的刺激之后,咬肌中CK、LDH含量较对照组明显升高,大鼠咬肌肌肉的活动性功能改变,并且肌肉组织也发生了相应的病理性变化,存在炎症性改变以及可能的能量代谢障碍等。长时间刺激使咬肌组织内COMT含量减少,CA分泌增加,引起咬肌痉挛收缩,肌肉血液循环障碍和缺血,继而发生功能障碍。
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