烟曲霉Zeta类谷胱甘肽转移酶基因的克隆表达及生物信息学研究

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烟曲霉(Aspergillus fumigatus)是近年来临床上仅次于白色念珠菌的一种重要的条件致病真菌,致侵袭性曲霉病,严重可危及生命。本文克隆了烟曲霉Zeta类GST基因(AfuGST),该基因全长696bp,编码231个氨基酸,分子量约为25.3Kda,并在大肠杆菌中高效表达了AfuGST蛋白,经分离纯化获得纯化的蛋白,活性测定结果显示AfuGST对底物ECA的活性是0.33μmol/min per mg,对底物NBD-Cl的活性是0.056μmol/min per mg,测活结果显示克隆的AfuGST具有GST酶活性。对AfuGST进行了生物信息学研究显示该蛋白整个二级结构中存在着大量的α螺旋,含量为48%,在N末端有五段β折叠,含量占18%。同源模拟了烟曲霉Zeta类谷胱甘肽转移酶的三维结构,发现N-末端结构域包括一个βαβαββα的结构基元,其中β折叠是以反平行的方式形成的混合四链β-折叠片。C末端结构域是一个纯α-螺旋,其核心由四个螺旋(α4/α5/α6/α7)形成的束组成。通过AfuGST的三维结构与小鼠Zeta类GST的三维结构进行比对,发现AfuGST的第17位SER是与GSH结合的重要功能氨基酸之一。该研究为进一步研究条件致病真菌的解毒、代谢机制奠定了基础。
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