论文部分内容阅读
目的：
血管性痴呆(VD)是指脑血管疾病引起的智能及认知功能障碍临床综合征。临床表现以伴发脑血管病而发生痴呆为特征。属中医学老年呆病范畴。随社会老龄化的发展，VD发病率也在逐年上升，严重影响着老年人的生活质量。因此，深入探讨VD的病理机制，开发、研制防治VD的有效药物具有重要意义。中医药以其独特的理论体系及丰富的实践经验，在防治VD方面表现出优势。本实验通过观察姜黄提取物对拟血管性痴呆小鼠行为学、病理学改变及血清、脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、降钙素基因相关肽(CGRP)、内皮素(ET)、乙酰胆碱酯酶(AchE)、谷氨酸(Glu)、钙离子(Ca<2+>)等含量的影响，探讨姜黄提取物治疗血管性痴呆的作用机制，为临床治疗VD提供实验依据。
方法：
选取清洁级昆明种雄性健康小鼠，采用脑缺血再灌注合并尾部放血降压制备拟血管性痴呆小鼠模型：造模时将小鼠用水合氯醛350 mg/kg腹腔注射麻醉，仰卧固定于手术台上，消毒，颈正中切口，体视显微镜下分离双侧颈总动脉，套“4”号丝线扣备用。拉紧丝扣，阻断血流20 min，同时在距尾尖1 cm处剪断放血约0.3 mL，热凝止血。松开丝扣灌注10 min后，再次阻断血流20 min，第2次再灌后观察30 min，缝合皮肤。术后每日肌注青霉素0.2万U，连续3d。其中假手术组只分离颈总动脉，套丝扣，但不阻断血流，尾部不放血，观察时间等与其它组相同。将造模成功的小鼠随机分为6组，每组13只。分别为假手术组、模型组、阳性药喜得镇组(0.7mg/kg)、姜黄提取物低剂量组(50mg/kg)、姜黄提取物中剂量组(100mg/kg)、姜黄提取物高剂量组(200mg/kg)。连续用药20d后，利用跳台实验观察小鼠行为学变化。行为学实验结束后分批断头处死小鼠，冰盘上快速剖取全脑，弃去嗅球及小脑。每组随机取3个全脑用10％甲醛溶液固定，留作组织切片进行病理形态学观察；其余大脑用冰生理盐水冲洗血液，再用滤纸拭干，电子天平称重后加入9倍冷生理盐水，在玻璃匀浆器中研磨成10％匀浆，离心15 min(4℃，3000 r/min)，提取上清液，-20℃冻存待检。采用黄嘌呤氧化酶法测定小鼠血清及脑组织中SOD活力，硫代巴比妥酸比色分析法测定MDA含量，采用放射免疫学方法检测CGRP和ET含量，AchE、Glu及Ca<2+>等含量测定亦严格按照试剂盒说明书操作。
结果：
1、姜黄提取物对血管性痴呆小鼠学习和记忆成绩的影响(跳台法)模型组(学习：1.54±1.13；记忆：1.08±0.64)同假手术组(学习：0.31±0.48；记忆：0.22±0.44)相比，无论是学习成绩还是记忆成绩，小鼠的错误次数均明显增多(P<0.01)，模型组(155.33±104.58)学习成绩的反应期较假手术组(11.23±9.39)明显延长(P<0.01)，模型组(38.85±26.45)记忆成绩的潜伏期较假手术组(280.82±47.04)明显缩短(P<0.01)；姜黄提取物低剂量组(学习成绩：反应期43.62±23.55，错误次数0.90±0.76：记忆成绩：潜伏期193.27±72.59，错误次数0.51±0.47)、姜黄提取物中剂量组(学习成绩：反应期36.14±15.41，错误次数0.62±0.45；记忆成绩：潜伏期231.89±82.13，错误次数0.45±0.52)、姜黄提取物高剂量组(学习成绩：反应期33.50±15.67，错误次数0.56±0.51；记忆成绩：潜伏期253.67±90.71，错误次数0.33±0.50)、喜得镇组(学习成绩：反应期34.43±32.51，错误次数0.53+0.52；记忆成绩：潜伏期241.35±77.82，错误次数0.31±0.48)各用药组与模型组比较，小鼠学习记忆成绩有明显提高，表现为小鼠反应期缩短，潜伏期延长，错误次数减少，差异有显著性意义(P<0.01或P<0.05)。提示姜黄提取物可改善拟血管性痴呆小鼠的学习记忆能力。
2、姜黄提取物对血管性痴呆小鼠血清及脑组织中SOD、MDA含量的影响模型组(血清SOD：83.64±11.87，脑组织SOD：77.44±10.51；血清MDA：8.52±1.17，脑组织MDA：855.75±141.36)同假手术组(血清SOD：97.68±10.62，脑组织SOD：102.35±9.47；血清MDA：6.05±0.94，脑组织MDA：691.40±48.96)相比，小鼠血清及脑组织中SOD活力明显下降，MDA含量明显升高，差异有显著性意义(P<0.01或P<0.05)；与模型组比较，姜黄提取物低剂量组(血清SOD：86.39±13.37，脑组织SOD：84.80±4.76；血清MDA：7.56±1.30，脑组织MDA：804.38±156.07)、姜黄提取物中剂量组(血清SOD：95.15±7.35，脑组织SOD：87.60±6.29；血清MDA：6.51±0.86，脑组织MDA：748.01±100.43)、姜黄提取物高剂量组(血清SOD：96.71±8.17，脑组织SOD：88.85±6.17；血清MDA：6.46±0.64，脑组织MDA：720.31±138.08)、喜得镇组(血清SOD：84.11±28.86，脑组织SOD：86.20±5.20；血清MDA：7.01±1.07，脑组织MDA：736.99±101.21)各给药组小鼠血清及脑组织中SOD活性明显升高，同时MDA水平降低，表明姜黄提取物可对抗自由基引起的脂质过氧化反应，对反复缺血再灌小鼠氧自由基代谢紊乱有调节作用。
3、姜黄提取物对血管性痴呆小鼠血清及脑组织中ET、CGRP含量的影响模型组(血清ET：39.87±9.47，脑组织ET：6.12±1.13；血清CGRP：22.26±3.77，脑组织CGRP：153.41±20.61)同假手术组(血清ET：28.81±4.25，脑组织ET：4.71±0.74；血清CGRP：41.98±9.31，脑组织CGRP：183.96±30.19)比较，小鼠血清及脑组织ET含量明显升高，CGRP含量明显下降，差异有显著性意义(P<0.01或P<0.05)，与模型组相比，姜黄提取物低剂量组(血清ET：38.34±10.12，脑组织ET：5.71±1.18；血清CGRP：23.77±3.40，脑组织CGRP：169.16±49.15)、姜黄提取物中剂量组(血清ET：32.15±5.12，脑组织ET：4.93±1.18；血清CGRP：28.13±5.89，脑组织CGRP：175.92±22.88)、姜黄提取物高剂量组(血清ET：31.13±5.57，脑组织ET：4.50±0.77；血清CGRP：29.16±2.98，脑组织CGRP：182.15±42.93)、喜得镇组(血清ET：35.88±6.46，脑组织ET：5.18±1.26；血清CGRP：27.84±5.20，脑组织CGRP：174.68±17.48)各用药组小鼠血清及脑组织中ET含量降低，同时CGRP水平升高，表明姜黄提取物可改变模型小鼠舒缩血管物质含量，改善脑组织血液供应。
4、姜黄提取物对血管性痴呆小鼠脑组织中AchE含量的影响模型组(0.4291±0.0589)同假手术组(0.6064±0.0710)相比，小鼠脑组织中AchE含量明显下降(P<0.01)；与模型组比较，姜黄提取物低剂量组(0.5846±0.0529)、姜黄提取物中剂量组(0.5560±0.0785)、姜黄提取物高剂量组(0.4984±0.0836)、喜得镇组(0.5429±0.0589)各给药组中AchE含量明显上调(P<0.01或P<0.05)，表明姜黄提取物可调节脑组织中AchE的活力。
5、姜黄提取物对血管性痴呆小鼠脑组织中Glu含量的影响模型组(0.0952±0.0127)同假手术组(0.0649±0.0045)相比，小鼠脑组织中Glu含量明显上升(P<0.01)；与模型组比较，姜黄提取物低剂量组(0.0737±0.0045)、姜黄提取物中剂量组(0.0627±0.0062)、姜黄提取物高剂量组(0.0693±0.0062)、喜得镇组(0.0720±0.0072)各给药组小鼠脑组织中Glu含量显著降低(P<0.01)，表明姜黄提取物可降低脑组织兴奋性氨基酸含量。
6、姜黄提取物对血管性痴呆小鼠血清中Ca<2+>含量的影响模型组(1.354±0.068)同假手术组(1.266±0.108)相比，小鼠血清中Ca<2+>含量明显升高(P<0.05)；与模型组比较，姜黄提取物低剂量组(1.332±0.111)、姜黄提取物中剂量组(1.317±0.105)、姜黄提取物高剂量组(1.273±0.104)、喜得镇组(1.328±0.160)各给药组小鼠血清中Ca<2+>含量均有所下降，以大剂量组效果显著(P<0.05)，提示姜黄提取物可减轻钙超载。
7、姜黄提取物对血管性痴呆小鼠脑组织病理形态学的影响光镜下一般形态学观察：假手术组海马CA，区锥体细胞2-3层，排列紧密，细胞核圆而大，核仁清晰，胞浆内尼氏体丰富，神经纤维密集，排列整齐。