目的：试图利用CpG的免疫刺激作用来提高犬用疫苗的免疫效果，在临床上筛选出对犬免疫增强效果良好的CpG-ISS，进一步探讨出DNA佐剂对犬细小病毒灭活疫苗和犬瘟热弱毒疫苗的免疫增强效果。 方法：1．构建四种CpG-ODN佐剂；从耗牛大肠杆菌中提取天然细菌CpG-DNA佐剂；测定细菌CpG-DNA和CpG-ODN的浓度和纯度；用PCR鉴定CpG-ODNx；初步鉴定为阳性后送公司测序；再用小白鼠做动物毒性实验。 2．观察CpG-ODNs及细菌CpG-DNA对犬细小病毒灭活疫苗的免疫增强效果。70只试验犬平均分为7组：分别用细菌CpG-DNA、CpG-ODN₁、CpG-ODN₂、CpG-ODN₃和CpG-ODN₄作为佐剂组，单用犬细小病毒灭活疫荫组和未用疫苗组。加强免疫后第15天测出血凝抑制抗体效价，比较各组的免疫效果，并筛选出较佳的CpG-ODN序列。 3．探讨细菌DNA、CpG-ODN₁与犬瘟热弱毒疫苗联合免疫犬后对犬的免疫增强效果。14只实验犬分为4组：分别用细菌DNA、CpG-ODN₁和铝胶作为佐剂组，每组4只实验犬。对照组的2只实验犬仅用犬瘟热弱毒疫苗免疫。在首免后第6和第11天采抗凝血，用RT-PCR检测血淋巴细胞中CDV，并在首免后第3、8、15、30和45天采血，通过微量血清中和试验测出病毒中和抗体效价。 结果： 1．成功制备出四种CpG-ODNs和天然细菌CpG-DNA，其浓度和纯度均合格，PCR鉴定CpG-ODN₁为阳性，序列分析结果表明质粒中含有目的序列。动物毒性试验表明，CpG-ODNs和细菌CpG-DNA均无明显毒副作用，可用于动物临床试验。 2．血凝抑制抗体效价高低依次为：ODN₁组、细菌CpG-DNA组、ODN₄组、ODN₃组、单用疫苗组、ODN₂组和未免疫组。统计分析表明：ODN₁组和细菌CpG-DNA组分别与其它六组都差异极显著（P＜0.01）；ODN₃和ODN₄组间差异不显著（P＞0.05）：ODN₂组和仅注射疫苗组间差异不显著（P＞0.05）。 3.RI飞PCR结果表明:首免后第6天，铝胶组和单用疫苗组犬均可检测到CDv阳性。细菌CpG一DNA组只有两只犬，CpG一ODNI组仅有一只犬可检测到CDV阳性。免疫后第11天，仅在铝胶组两只犬和单用疫苗组一只犬中检分则到CnV阳性.、这、·结论f司接说明:细菌CpG一DNA和CpG一oDN，能使犬体内抗体效价升.荡速度比铝胶快。 4.中和抗体效价检测结果表明:各免疫法均能诱导CDV中和抗体产生。，I，平1.抗体水平.;’石低依次为:CpG一ooNI全11、细菌Cpo一oNA至11、悦毛J佼组不IllTI.)IJ乡交l、，[夕11一统11一分析农l，j:（’l）(〕一ODNI到t’J细菌er(l一ONA夕}L处异显著（P<（）.（）5），而’J其它两组都差异极一显著（P<（）.01）;细菌DNA组也与其它两组差异极显著（P<0.01）;铝胶组和单川疫苗组间差异不显著（P>.05）。同时还发现细菌CpG一DNA和CpG一ODNI组诱导中和抗体产生较铝胶组要早，cpG一oDNI组到第八天中和抗体就能达到有效抵抗CDv感染的效价。 结论:本试验结果表明，155序列GACG下T和GTCGr门，均对犬有免疫刺激作用，这一结论可为今后研制犬cpG佐剂提供一定的实验基础。cpG一oDN;作为佐剂在犬体内具有显著的免疫增强效果，对接种犬无明显毒副作用，可望进一步开发为防制犬传染病的一种新型佐剂。